毛稔無菌再生體系構(gòu)建與多倍體誘導(dǎo)研究.pdf

1、毛稔（Melastoma sanguineum）是野牡丹科（Melastomataceae）野牡丹屬（Melastoma）一種常綠觀賞植物，具有較高的觀賞價值，具備綠化、美化城市環(huán)境的巨大潛力，但目前仍處于未開發(fā)狀態(tài)，繁殖特性等有待研究，同時其存在花期短，耐旱性不強(qiáng)，適應(yīng)性差等問題，從而限制了其廣泛應(yīng)用。多倍體育種是提高毛稔觀賞價值和抗性的重要途徑。本試驗(yàn)在毛稔種子萌發(fā)特性研究的基礎(chǔ)上，利用秋水仙素浸泡處理萌動種子，棉浸法處理生長點(diǎn)誘導(dǎo)

2、毛稔多倍體；同時在建立毛稔再生體系的研究基礎(chǔ)上，采用秋水仙素混培法、浸泡法處理毛稔愈傷組織、帶芽莖段誘導(dǎo)多倍體，通過形態(tài)學(xué)觀察、氣孔特征鑒定、染色體計(jì)數(shù)、流式細(xì)胞術(shù)鑒定多倍體，以期探索出快速、高效的毛稔多倍體誘導(dǎo)方法，得到葉形奇特、花徑更大、抗性更強(qiáng)的毛稔新種質(zhì)。主要研究結(jié)果如下：
　　（1）毛稔再生體系的研究毛稔葉片愈傷組織最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+0.5 mg·L-16-BA+2.0mg·L-12,4-D+0.1mg·L-1NAA

3、，在12 h/d光照下誘導(dǎo)40d，愈傷誘導(dǎo)率為96％；愈傷組織增殖倍數(shù)隨NAA濃度升高而增加，愈傷組織增殖最適培養(yǎng)基為MS+0.5 mg·L-1 NAA+0.5 mg·L-16-BA，平均增殖倍數(shù)為1.9；葉片形成的愈傷組織分化率極低，分化率隨6-BA濃度升高而增加，愈傷組織分化最適培養(yǎng)基為MS+0.1 mg·L-1NAA+2.0mg·L-16-BA，分化率為10%；最適生根培養(yǎng)基為1/2MS+0.1 mg·L-1NAA，生根率為88.

4、89%。
　?。?）毛稔多倍體誘導(dǎo)研究在種子的萌發(fā)試驗(yàn)中，對照組發(fā)芽率為31%，處理組發(fā)芽率最高為58%，低濃度的6-BA、GA3對毛稔種子萌發(fā)有促進(jìn)作用。通過極差分析得出，毛稔種子萌發(fā)的最佳激素處理為GA350mg·L-1、IAA100mg·L-1、6-BA20mg·L-1三種溶液分別浸種24 h，最佳萌發(fā)溫度為23℃。
　　田間誘導(dǎo)中，生長點(diǎn)處理更容易獲得多倍體變異植株，以0.2%秋水仙素處理4 d誘變效果最好，誘變率為

5、45%，通過形態(tài)測量、葉片氣孔特征及流式細(xì)胞術(shù)鑒定共獲得11株多倍體植株，而萌動種子處理誘變率最高僅為6.67%，通過葉片氣孔特征及流式細(xì)胞術(shù)鑒定共獲得5株多倍體植株；秋水仙素結(jié)合組織培養(yǎng)技術(shù)處理毛稔無菌苗試驗(yàn)中，愈傷組織不適宜作為誘導(dǎo)材料，以處理帶芽莖段為好。浸泡法處理帶芽莖段以0.1%處理24 h誘變率最高，為11.67%，帶芽莖段混培處理以0.1%處理10 d效果最好，誘變率為26.67%，混培法處理愈傷組織以添加0.1%秋水仙素

6、處理10-20 d誘變率最高，平均僅為6.67%，通過葉片氣孔特征、染色體計(jì)數(shù)、流式細(xì)胞術(shù)鑒定各獲得多倍體植株10、6、3株。
　　多倍體植株主要表現(xiàn)為葉片皺縮、變厚，莖稈加粗，節(jié)間距離縮短；其氣孔密度為二倍體的66.83%，保衛(wèi)細(xì)胞長和寬分別為二倍體的1.23倍和1.27倍，保衛(wèi)細(xì)胞內(nèi)葉綠體數(shù)目為二倍體的1.51倍；二倍體毛稔染色體數(shù)目約為2n=2x=24，多倍體染色體數(shù)為非整倍體變異，數(shù)目約為40條；流式細(xì)胞術(shù)是一種可以快速、