油莎豆再生體系的建立及多倍體誘導.pdf

1、本研究主要對油莎豆莖尖培養(yǎng)、愈傷組織的誘導與植株再生、組織培養(yǎng)中的褐化問題、無菌苗的移栽和栽培管理、秋水仙素誘導產生多倍體等方面進行了探討，建立了油莎豆離體培養(yǎng)體系，包括油莎豆的消毒、無菌苗的獲得、外植體的選擇、最優(yōu)培養(yǎng)基與培養(yǎng)方式的選擇、無根苗的生根與移栽、無菌苗的栽培管理以及油莎豆愈傷組織誘導和形態(tài)學觀察、秋水仙素誘導的最適條件、多倍體的鑒定等；主要研究結果如下： 1，油莎豆再生體系的建立以無菌培養(yǎng)的莖段、葉片、根做為外植體

2、，通過不同激素配比，不同培養(yǎng)方式的比較，來篩選莖尖誘導、生根培養(yǎng)、愈傷組織誘導的最佳培養(yǎng)基；選取不同外植體，來探尋誘導愈傷組織的最佳材料；通過添加不同褐變抑制劑、選用不同培養(yǎng)方式，來降低抑制油莎豆組織培養(yǎng)中的褐變發(fā)生率。試驗結果表明：外植體用70％的酒精浸泡1min，再用10％NaCIO浸泡40min，或用70％的酒精浸泡1min，再用0.2％升汞浸泡40min，最后無菌水沖洗5次以上，所獲得的消毒效果最好；莖尖誘導最優(yōu)培養(yǎng)基為MS+6

3、BA0.5㎎/L+TDZ0.5㎎/L+ZT0.5㎎/L+3％蔗糖+0.7％瓊脂(PH5.8)；愈傷組織誘導最佳培養(yǎng)基MS+2，4-D3.0㎎/L+KT1.0㎎/L+6BA0.5㎎/L+NAA0.5㎎/L+600-800mg/LCH3％蔗糖+0.7％瓊脂(PH5.8)；只有切取的莖段基部能誘導出愈傷組織。油莎豆抑制褐變的有效方法是在培養(yǎng)墓中添加高濃度2，4-D和4g/LPVP，并且黑暗條件下培養(yǎng)兩周；最佳生根培養(yǎng)基是1/2MS+IBA0.

4、2㎎/L+3％蔗糖+0.7％瓊脂(PH5.8)，組培苗在轉入生根培養(yǎng)基十天后，生根率可達100％；將培養(yǎng)瓶中的小苗煉苗2天后，移入花盆中，存活率可達85％。 2.油莎豆塊莖采收后即使在適宜條件下也不能正常萌發(fā)，在4℃下貯藏1-2周后，方可萌發(fā)。因為油莎豆在冬季存在休眠現象，不同溫度的交替貯藏，在一定范圍內可以促進塊莖休眠的解除。 3.秋水仙素是人工誘導多倍體的主要化學物質，用于處理的植物材料和處理方法很多，其中以成熟種子

5、為材料進行染色體加倍是最為常用的方法。近年來，隨著植物組織培養(yǎng)技術的發(fā)展和完善，利用離體組織染色體加倍法進行多倍體誘導已在許多植物中取得成果。而要利用組織培養(yǎng)對離體組織進行染色體加倍，首先要建立高效的組織培養(yǎng)再生體系。油莎豆多倍體的誘導以0.2％的秋水仙素水溶液浸泡處理油莎豆莖尖48h能獲得理想的存活率和誘導率，誘導率達43.7％，存活率為44.4％。對油莎豆二倍體和多倍體的氣孔進行了觀察比較發(fā)現多倍體與二倍體相比，氣孔長度減少了5.8