蘭州百合多倍體誘導及鑒定.pdf

1、百合(Lilium brownn. F. E. Brown. Var Viridum Baker)為百合科百合屬多年生草本植物，不僅具有較高的觀賞價值，有些品種還具有很高的食用價值和藥用價值。長期的無性繁殖使得各種病毒在百合植株中逐代積累，導致品種嚴重退化，利用快繁技術可在短時間內生產大量優(yōu)質種苗。而且，經過染色體加倍的多倍體百合植株鱗片肥厚、健壯、高產優(yōu)質等特點。因此，百合的快速繁殖技術和染色體加倍研究具有十分重要的理論意義和經濟價值

2、。
　　 本研究以蘭州百合為試驗材料，利用快速繁殖技術建立了蘭州百合的快速繁殖體系，并利用秋水仙素對蘭州百合進行了人工多倍體誘導，初步篩選出了一批多倍體材料。蘭州百合快速繁殖體系的建立，主要是對外植體的消毒方式、初代培養(yǎng)基、繼代增殖培養(yǎng)基及生根培養(yǎng)基進行了篩選。獲得無菌的外植體是植物組織培養(yǎng)中最基礎最重要的一環(huán)，外植體的消毒效果和分化率直接影響著試驗的進程。篩選出的最佳消毒方法是洗滌劑浸泡10min，自來水沖洗5h，95％的乙醇

3、消毒100s，0.1％升汞消毒12 min，無菌水沖洗4～6 次，可得到較高的成活率和誘導率。培養(yǎng)基中的激素濃度與配比是影響百合初代培養(yǎng)、繼代增殖培養(yǎng)及生根培養(yǎng)重要因素。初代誘導分化的最適培養(yǎng)基是MS+BA1.0 mg/L+NAA1.0 mg/L+3％蔗糖，最佳繼代增殖培養(yǎng)基是MS+BA0.5+NAA0.2mg/L+3％蔗糖，百合生根相對較容易，最佳的生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA0.2 mg/L+3％蔗糖。在建立百合快速繁殖體系的基礎

4、上，利用秋水仙素溶液對蘭州百合進行了人工多倍體誘導，誘導多倍體的材料為百合鱗片，方法采用棉球覆蓋法，秋水仙素處理的最佳濃度和最佳處理時間分別為0.1％、24h，細胞誘變率達60％。對獲得的蘭州百合多倍體與二倍體進行了外部形態(tài)和的氣孔觀察比較，結果表明：在相同生長階段和環(huán)境條件下，多倍體植株體現了器官的巨大性，葉片顏色較二倍體深，葉片較厚，并且葉面皺折、粗糙，較脆，易折斷、生長發(fā)育遲緩，形態(tài)畸形、矮化。通過對多倍體和二倍體葉片氣孔大小及密

5、度的測定，我們發(fā)現，多倍體植株氣孔大小明顯增大，長度為二倍體的162％，寬度是二倍體的144％，氣孔長度的增大程度要大于寬度的增大程度。氣孔的密度（單位面積氣孔數目）減小，是二倍體的33％，同時保衛(wèi)細胞內葉綠體數明顯增多。通過方差分析，氣孔大小及密度差異達到極顯著水平。通過對蘭州百合多倍體植株和二倍體植株根尖染色體計數發(fā)現，二倍體植株所有細胞染色體數為2n=2x=24，而多倍體植株中有的細胞染色體數為2n=2x=24，而有些細胞染色體數