不同光周期對不同秋眠型苜蓿phyA和phyB mRNA相對含量的影響.pdf

1、我國近幾年由于種植業(yè)結(jié)構(gòu)的調(diào)整和畜牧業(yè)的迅猛發(fā)展，苜蓿的種植面積急劇擴大，解決生產(chǎn)上迫在眉睫的品種秋眠性選擇以及探討國際上秋眠機理不清所帶來的困擾，急需我國在秋眠性研究上有所突破。目前對苜蓿秋眠性機理研究很比較少，僅從一些形態(tài)學變化和生理生化指標水平上的差別等來研究苜蓿的秋眠性，但這并非是調(diào)控苜蓿秋眠的根本原因，因此迫切需要一種更先進的方法對苜蓿秋眠性的機理及其調(diào)控進行研究。有研究表明，光敏色素與苜蓿的秋眠性相關(guān)，而光敏色素家族至少包含

2、有兩種光敏色素基因A和B，且這些光敏色素之間都相互聯(lián)系、相互制約。低溫和短日照是引起苜蓿秋眠性的主要環(huán)境因子，phyA、phyB作為主要的光受體調(diào)節(jié)苜蓿的秋眠，為探討phyA、phyB在苜蓿秋眠中的調(diào)控機理，本試驗分為兩個部分，溫度試驗：試驗在短日照（8h）的情況下，研究不同溫度5℃、15℃、25℃、35℃對秋眠型苜蓿（Vernal）phyA、phyBmRNA相對含量的影響；光周期試驗：采用SYERGreen熒光染料法來測定不同光周期（

3、8h、12h、16h）和（6h、12h、18h）對三種秋眠型苜蓿phyA、phyBmRNA相對含量，首先，選取紫花苜蓿葉片為材料，利用蒺藜狀苜蓿的肌動蛋白基因設(shè)計特異性引物，擴增出目的基因的cDNA進行測序，測序結(jié)果在NCBI基因庫中利用Blast與其他高等植物肌動蛋白基因序列進行了比對、分析，結(jié)果證明所提取的基因為紫花苜蓿肌動蛋白基因的片段，因此，可以進行下一步mRNA的相對定量。 溫度試驗采用半定量RT-PCR方法（灰度分析

4、），來測定在8h（短日照）條件下，不同溫度處理對秋眠型苜蓿（二級品種——佛拿爾）phyA、phyBmRNA相對含量的影響，試驗證明phyA在較低溫度情況下合成量較低，溫度較高時合成量較高，而phyB在較低溫度的條件下合成量顯著高于在較高溫度條件下合成量，這說明phyA、phyB確實存在在互作效應(yīng)，或者也可能是與其他光敏色素家族成員產(chǎn)生互作，在低溫短日照條件下phyB合成量高，這說明phyB在調(diào)控秋眠中發(fā)揮了更重要的作用。 光周期

5、試驗采用FQ-PCRSYBR-Green方法測定不同光周期條件下不同秋眠型苜蓿phyA、phyBmRNA的表達，試驗證明，在短、中日照情況下，phyA、phyBmRNA含量較高，長日照情況下phyA、phyBmRNA合成量較小，其中phyB合成量規(guī)律與其在蛋白水平的表達基本一致，試驗也再次驗證了秋眠型苜蓿的phyBmRNA的含量遠遠高于半秋眠型、非秋眠型苜蓿，秋眠二級phyBmRNA的表達在不同光照時間條件下，差異極顯著，在短、中日照情