蒺藜苜蓿6種光受體基因的預(yù)測和紫花苜蓿PHYB、CRY1、CRY2B、PHYA基因的克隆與分析.pdf

1、紫花苜蓿是一種重要的豆科牧草，其秋眠特性與抗寒性和生產(chǎn)性能相關(guān)。苜蓿秋眠是一種光周期反應(yīng)。光敏色素和隱花色素等是光周期反應(yīng)的受體。因而研究各種光受體與苜蓿秋眠性之間的聯(lián)系可能是揭示苜蓿秋眠性機(jī)理的有效途徑。 本研究采用生物信息學(xué)方法預(yù)測了蒺藜苜蓿的6種光受體基因，分別為光敏色素A、光敏色素B、隱花色素1、隱花色素2A、隱花色素2B和向光素1，涵蓋了目前主要的3種光受體。 以預(yù)測的蒺藜苜蓿光敏色素B、隱花色素1和隱花色素2

2、B為PCR引物設(shè)計模板，對紫花苜蓿相應(yīng)基因進(jìn)行了克隆測序。其中，紫花苜蓿光敏色素B最終得到7150bp的基因組序列和3425bp編碼序列（編碼1141aa），后者達(dá)到預(yù)測的蒺藜苜蓿PHYB基因編碼序列的99．0％；隱花色素1獲得4318bp的基因組序列和2030bp編碼序列（編碼676aa），達(dá)到預(yù)測的蒺藜苜蓿隱花色素1基因編碼序列的99．5％；隱花色素2B獲得2251bp的基因組序列和1453bp編碼序列（484aa），達(dá)到預(yù)測的蒺藜

3、苜蓿隱花色素2B基因編碼序列的80．3％。說明利用生物信息學(xué)方法預(yù)測蒺藜苜蓿基因，然后應(yīng)用于紫花苜蓿研究的方法高效、可行。另外，本實驗對這3個基因的外顯子-內(nèi)含子邊界及保守區(qū)進(jìn)行了分析。 本實驗通過使用染色體步移法擴(kuò)增得到了紫花苜蓿光敏色素A和光敏色素的5’端序列，長度分別為1309bp和1752bp，補(bǔ)齊了之前實驗所欠缺的5’端編碼序列。說明染色體步移法是一種獲取已知序列相鄰未知序列的有效方法。 通過使用一對擴(kuò)增長度約