紫花苜蓿MsZFN鋅指蛋白基因啟動子MsZPP的克隆與序列分析.pdf

1、紫花苜蓿（Medicago sativa L.）是世界上分布最廣的一種多年生豆科牧草，也是我國最重要的豆科牧草之一。它不僅產量高且營養(yǎng)豐富，被譽為“牧草之王”。傳統(tǒng)的育種方法主要是通過雜交的手段獲得新品種，需要的周期長，工作量大。將分子生物學的方法運用到了抗性育種工作中，可以縮短育種年限，提高育種效率。本試驗主要研究的是一個鋅指蛋白基因的啟動子。鋅指蛋白是真核生物基因組中最豐富的一類轉錄因子，這種蛋白質與Zn2+結合形成穩(wěn)定的手指結構，

2、在基因的表達調控、細胞分化、胚胎發(fā)育等生命過程中發(fā)揮重要作用。動物及人體內的鋅指蛋白的功能已經有了較為深入的了解，近年來，通過不斷的研究發(fā)現(xiàn)，鋅指蛋白在植物中也發(fā)揮了重要作用，參與了植物抵御其生長過程中所經歷的各種脅迫反應。 啟動子（promoter）是RNA聚合酶能夠識別并與之結合，從而起始基因轉錄的序列[76]，作為轉錄水平上一種重要的調控元件，研究啟動子，對我們了解生物的生長發(fā)育過程，探討生物對其生長環(huán)境的適應機制以及更好

3、地控制外源基因在轉基因植物中的表達等具有重要意義。本研究取得的主要結果如下： 1.應用巢式PCR技術，克隆獲得了鋅指蛋白基因MsZFN的上游啟動子區(qū)，大約1500bp左右，在Blast數(shù)據(jù)庫上進行同源性比較，該基因為首次獲得，與截形苜蓿7號染色體克隆mth2—36p20的全序列有88％的相似性。在GenBank上登錄，登錄號為FJ161979.1，命名為MsZPP。對獲得的序列進行分析，發(fā)現(xiàn)了多個CAAT—box和TATA—bo

4、x，TATA框具有將RNA聚合酶Ⅱ引導到正確的轉錄起始位點的功能，CAAT框主要控制著轉錄的起始頻率，是調控轉錄速率的元件，與啟動子的特異性無直接的關系。還發(fā)現(xiàn)了多個潛在的順式作用元件，如與ABA誘導相關的順式作用元件ABA響應元件（ABRE），與干旱誘導有關的MYB結合位點（MBS），與茉莉酸甲酯反應相關的順式調控元件TGACG—motif，以及多個光響應元ACE，G—box，GTl—motif， I—box，SpI。 2.構