小麥nsLTPs基因及啟動子的克隆與功能分析.pdf

1、植物非特異轉脂蛋白（non-specific Lipid Transfer Poteins, nsLTPs）在植物中表達豐富、功能繁多、參與植物多種生長發(fā)育、抗病抗逆等過程，然而對小麥中的非特異轉脂蛋白基因的功能研究少之又少。在本研究中，我們分析了來自小麥的三個植物非特異轉脂蛋白基因及啟動子的功能，主要的工作如下：
　　從小麥中克隆了三個植物非特異轉脂蛋白基因并在擬南芥中過量表達，對轉基因擬南芥進行低溫脅迫鑒定試驗表明，在冷害處理

2、中三個 TaLTPI擬南芥轉基因苗比野生型根長明顯增長，說明小麥中的 TaLTPs基因可能有保守的抵御冷害的功能，對于冷害脅迫下根部的生長起到促進作用。
　　（1）對小麥幼苗進行脅迫鑒定試驗表明，TaLTPIb.1、TaLTPIb.5基因在低溫處理、創(chuàng)傷處理、干旱處理中都是明顯上調表達的，并且表達模式相似；而 TaLTPId.1只對黑暗處理有明顯響應。在激素處理中，三個 TaLTP基因都受到水楊酸（Salicylic acid,

3、SA）誘導，而TaLTPId.1也可以被茉莉酸（Jasmonic acid，JA）誘導。
　?。?）構建了35S::TaLTPIb.1::EGFP和35S::TaLTPIb.5::EGFP、35S::TaLTPId.1::EG FP融合載體，分別利用農桿菌介導、基因槍的方法在煙草葉片和洋蔥表皮上對三個 Ta LTPI基因進行了亞細胞定位，發(fā)現三個基因都定位于細胞膜上，而 TaLTPId.1在細胞質中也有一些信號，暗示了 TaLTP

4、I基因在具有保守功能同時也發(fā)生了一些亞功能化的分化。
　?。?）利用三個基因的特異引物將 TaLTPIb.1、TaLTPIb.5定位在3B染色體與3D染色體上，而TaLTPId.1則定位于5D染色體。
　　（4）將 TaLTPIb.1基因上游-723bp的啟動子序列融合 GUS基因構建至pCambia1391Z，利用農桿菌介導轉入短柄草，發(fā)現啟動子活性主要集中在轉基因苗幼葉、幼芽的表皮細胞中，并且受創(chuàng)傷處理誘導，受黑暗處理抑