玉米PIP5K基因啟動(dòng)子的克隆與功能分析.pdf

1、啟動(dòng)子在植物基因表達(dá)調(diào)控過(guò)程中起著重要作用。對(duì)于植物基因啟動(dòng)子的克隆及其功能研究有助于了解信號(hào)傳遞途徑和基因表達(dá)調(diào)控模式，為植物轉(zhuǎn)基因工程研究提供理論依據(jù)。組織特異性啟動(dòng)子作為啟動(dòng)子的一種，在特定組織和一定發(fā)育階段啟動(dòng)基因的表達(dá)，能減少不必要的浪費(fèi)。PIP5K基因家族作為根特異性轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的一種，在協(xié)調(diào)植物的生長(zhǎng)中起著至關(guān)重要的作用，特別是應(yīng)對(duì)環(huán)境因素時(shí)，有啟動(dòng)和促進(jìn)根毛尖端增長(zhǎng)的功能。
　　 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)生物信息分析PIP5K

2、基因序列，克隆出PIP5K基因的啟動(dòng)子，并經(jīng)過(guò)啟動(dòng)子的刪減實(shí)驗(yàn)，水稻的遺傳轉(zhuǎn)化及水稻組織的GUS染色實(shí)驗(yàn)等，取得結(jié)果如下：
　　 1.根據(jù)已知報(bào)告基因分析預(yù)測(cè)，設(shè)計(jì)出特異性引物，以玉米B73基因組DNA為模板，擴(kuò)增出該基因的啟動(dòng)子部分，命名為P2036。將P2036啟動(dòng)子的序列放在啟動(dòng)子順式作用元件預(yù)測(cè)網(wǎng)站上進(jìn)行分析，預(yù)測(cè)到存在TATA盒、CAAT盒、六個(gè)光應(yīng)答元件和六個(gè)與誘導(dǎo)應(yīng)答先關(guān)元件，預(yù)測(cè)該啟動(dòng)子是一個(gè)具有完整功能的啟動(dòng)子

3、。
　　 2.依次克隆出4個(gè)5'端缺失啟動(dòng)子，5個(gè)啟動(dòng)子的長(zhǎng)度依次為2036bp、1440bp、996bp、651bp和344bp。將5個(gè)啟動(dòng)子與含有GUS報(bào)告基因的質(zhì)粒pCAMBIA1301連接并構(gòu)建出5個(gè)5'端缺失啟動(dòng)子載體。
　　 3.利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將構(gòu)建的所有植物表達(dá)載體轉(zhuǎn)化水稻，獲得了34棵轉(zhuǎn)基因植株，對(duì)獲得的轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行潮霉素檢測(cè)，其中21棵檢測(cè)為陽(yáng)性。將檢測(cè)為陽(yáng)性的轉(zhuǎn)基因各個(gè)組織進(jìn)行GUS染色，根據(jù)染色