桃PG酶基因啟動子克隆及序列分析.pdf

1、桃是我國最古老的果樹之一，屬于薔薇科(Rosaceae)桃亞屬(Amygdalus Prunus persica (L.)Batsch.)果樹，生長遍及南北半球溫帶地區(qū)。其果實屬于呼吸躍變型，在發(fā)育與成熟過程中果實經(jīng)歷著色澤、質(zhì)地、風(fēng)味等一系列的深刻變化，特別是在采后的后熟階段，果實硬度下降很快，降低了果實的商品性能。
　　 在桃果實后熟階段多聚半乳糖醛酸酶(PG酶)起主要作用，它可以使果實的果膠物質(zhì)降解、細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)破壞，導(dǎo)致果

2、實快速軟化。該酶的釋放與表達是受基因嚴(yán)格調(diào)控的，而啟動子是基因表達調(diào)控的重要順式元件，對基因表達與否以及表達量的高低起著重要作用。延緩果實后熟、抑制PG酶的表達，進而創(chuàng)造新的種質(zhì)，因此研究PG基因的調(diào)控元件——啟動子就具有了重要意義。
　　 本研究的主要目的是克隆桃PG基因的啟動子，對該啟動子序列進行分析，并在此基礎(chǔ)上構(gòu)建缺失表達載體，為下一步研究其功能奠定基礎(chǔ)。
　　 研究的主要內(nèi)容為：比對已報道的桃PG基因序列，依據(jù)

3、引物設(shè)計原則，設(shè)計三條特異引物；通過改良CTAB法提取DNA；采用Tail-PCR方法擴增并克隆到桃PG基因5′端側(cè)翼序列，并對該序列進行分析；登陸NCBI進行BLASTn比對；序列提交GenBank數(shù)據(jù)庫；擴增并克隆缺失片段，構(gòu)建缺失表達載體。
　　 研究結(jié)果表明克隆到的986bp序列3′端與已報道的PG酶基因序列的5′端部分序列同源性為96％，剩余5′端906bp在GenBank中沒有同源片段，表明該片段為PG酶基因5′端側(cè)

4、翼序列。遞交數(shù)據(jù)庫，登陸號為FJ940722。用Neural Network Promoter Prediction、PLACE等軟件對序列進行基礎(chǔ)啟動子、轉(zhuǎn)錄起始位點、順式作用元件和起始密碼子等分析，發(fā)現(xiàn)在789bp-839bp位置存在基礎(chǔ)啟動子序列，轉(zhuǎn)錄起始位點是位于828 bp的堿基C，其可能性為0.98；序列中含有豐富的順式作用元件，除了具有基本的CAAT-BOX和TATA-BOX外，還含有其他重要作用元件GATA-BOX、 A