HMGA1基因啟動(dòng)子克隆及活性區(qū)域的分析.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:本課題研究的目的在于獲得HMGA1基因啟動(dòng)子序列,并對(duì)其活性序列進(jìn)行分析,明確HMGA1基因啟動(dòng)子在人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC-12)和人乳腺癌MCF-7細(xì)胞中的活性中心序列;同時(shí)觀察HMGA1對(duì)高糖誘導(dǎo)的HUVEC-12細(xì)胞凋亡的影響。
　　方法:采用 PCR技術(shù)克隆 HMGA1基因啟動(dòng)子序列,構(gòu)建一系列不同長(zhǎng)度的HMGA1啟動(dòng)子熒光素酶報(bào)告基因載體,分別轉(zhuǎn)染至HUVEC-12和MCF-7細(xì)胞中,以熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)分析鑒

2、定HMGA1基因啟動(dòng)子的主要活性區(qū)域。構(gòu)建HMGA1表達(dá)質(zhì)粒,將其轉(zhuǎn)染至HUVEC-12細(xì)胞,利用流式細(xì)胞術(shù)觀察 HMGA1對(duì)高糖誘導(dǎo)的HUVEC-12細(xì)胞凋亡的影響。
　　結(jié)果:1)成功構(gòu)建了HMGA1基因轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游1367、1024、598及256bp片段的雙熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒載體,發(fā)現(xiàn) HMGA1基因轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游256bp序列在MCF-7細(xì)胞顯示出較高啟動(dòng)子活性,而在HUVEC-12細(xì)胞中其轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游598

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