家蠶絲膠基因啟動子的克隆與活性分析及轉基因研究.pdf

1、家蠶絲腺是合成、分泌蠶絲蛋白的重要器官，具有強大的合成和分泌蛋白質的能力。利用家蠶絲腺生物反應器安全、高效地生產(chǎn)藥用蛋白具有實用的可行性和很好的應用前景。 本實驗以家蠶絲膠基因啟動子ser-1、人胰島素樣生長因子hIGF-1、絲素基因輕鏈多聚腺苷酸信號、絲素基因輕鏈第一內(nèi)含子(增強子)以及新霉素抗性基因等為元件，通過多次克隆將它們插入到PigA3GFP轉座載體中。經(jīng)PCR、酶切鑒定及測序驗證表明各元件已按照設計的方式插入到Pig

2、A3GFP轉座載體，分別構建了由SV40啟動子和IE-1啟動子驅動的新霉素抗性基因所組成的PigA3GFP-hIGF-1.A和PigA3GFP-hIGF-1.B轉基因載體。 通過脂質體介導法和精子介導法及基因槍法將轉基因載體分別導入BmN細胞和家蠶體內(nèi)，獲得發(fā)熒光的BmN細胞和家蠶幼蟲。我們確定用于BmN細胞篩選的G418的最佳濃度為700μg/mL～800μg/mL，并已經(jīng)對轉基因BmN細胞進行了連續(xù)篩選，獲得比例較高的發(fā)熒光