水稻pib基因內(nèi)含子1、2對Pib啟動子活性影響的轉(zhuǎn)基因分析.pdf

1、稻瘟病是由子囊菌Magnaporthe grisea Barr[無性世代為Pyricularia grisea Saco.]所引起的真菌性水稻病害(Herbert，1971)，與紋枯病、白葉枯病并稱為水稻的三大主要病害；幾乎在每個栽培水稻的國家和地區(qū)都有此病發(fā)生，只要條件適宜，就容易流行成災(zāi)，甚至顆粒無收。培育抗病品種是解決這一難題的關(guān)鍵，通過基因工程的方法將抗病基因?qū)敫胁∷酒贩N，對水稻抗病育種有著十分重要的理論意義和應(yīng)用價值。

2、r>　　 Pib基因是水稻中第一個被克隆的抗稻瘟病基因，屬于NBS-LRR抗病基因家族。在NCBI(美國國家生物技術(shù)信息中心)網(wǎng)站http：//www.ncbi.nlm.nih.gov對pib基因進行搜索，找到已經(jīng)公布的pib基因核苷酸序列及該基因的相應(yīng)分析。分析表明，pib基因10322 bp長DNA片段包含了5.4kb左右完整的結(jié)構(gòu)基因(ORF)、3573bp的ATG上游區(qū)段和1000多bp的下游區(qū)段。pib是一個有4個內(nèi)含子、5

3、個外顯子的分裂基因，其中兩個內(nèi)含子在起始密碼之前。
　　 根據(jù)Pib基因的結(jié)構(gòu)特點，本研究以pib基因3’缺失啟動子融合報告基因的構(gòu)建方式來分析內(nèi)含子對pib啟動活性和暗誘導(dǎo)活性的影響，相應(yīng)載體分別命名為pNAR1101、pNAR1102和pNAR1103。以農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法轉(zhuǎn)化中感稻瘟病水稻品種R109，共獲得98株轉(zhuǎn)基因植株。其中pNAR1101的轉(zhuǎn)化植株32株，pNAR1102的轉(zhuǎn)化植株30株，pNAR1103的轉(zhuǎn)化植株3

4、6株。經(jīng)PCR、Southern blot分析表明，Pib基因片段已經(jīng)整合到R109的基因組中，且全部為單拷貝。
　　 對上述不同長度3’端缺失的pib啟動子驅(qū)動gus基因的水稻轉(zhuǎn)基因植株，進行Gus熒光定量分析，系統(tǒng)研究了pib啟動子中內(nèi)含子的缺失對與啟動子啟動活性和暗誘導(dǎo)性的影響。
　　 熒光定量分析結(jié)果表明，這兩個內(nèi)含子及相鄰pib啟動子下游3’端序列缺失都不能使pib啟動子喪失其啟動活性和暗誘導(dǎo)活性，但隨著內(nèi)含子