ANK、Pita基因啟動(dòng)子在水稻中誘導(dǎo)表達(dá)活性分析.pdf

1、基因的表達(dá)在很大程度上受其啟動(dòng)子與其特定的順式作用元件的互作所決定，分析啟動(dòng)子的表達(dá)調(diào)控規(guī)律是明確基因功能的重要途徑。植物在長(zhǎng)期的進(jìn)化過程中，發(fā)展了誘導(dǎo)型抗性，將對(duì)病原菌等逆境抗性限制在特定的條件下以減少不必要的物質(zhì)和能量的浪費(fèi)并減少能殺菌的有毒次生代謝物對(duì)植物細(xì)胞本身的毒害作用。因此，分析植物抗病基因的啟動(dòng)子不僅有利于闡明植物抗病基因的功能，還可為植物抗病基因工程改善外源抗病基因的表達(dá)提供有應(yīng)用價(jià)值的誘導(dǎo)型啟動(dòng)子。鑒于此，本項(xiàng)目通過獲

2、得啟動(dòng)子與GUS報(bào)告基因載體的轉(zhuǎn)基因水稻的T1代株系，分析了水稻抗稻瘟病基因Pita和對(duì)病原菌等逆境脅迫表現(xiàn)出明顯應(yīng)答作用的水稻錨蛋白基因的啟動(dòng)子，旨在分析上述基因在水稻中的表達(dá)規(guī)律，明確其作為誘導(dǎo)型啟動(dòng)子應(yīng)用于水稻抗病基因中的可能性。主要結(jié)果如下：
　　 1、水稻錨蛋白基因啟動(dòng)子的功能分析：根據(jù)網(wǎng)上預(yù)測(cè)的水稻錨蛋白基因設(shè)計(jì)引物從水稻(粳稻品種日本晴)中擴(kuò)增了該基因的啟動(dòng)子片段，稱其為OsANKp，將其啟動(dòng)子序列放在啟動(dòng)子順式作

3、用元件預(yù)測(cè)網(wǎng)站PALCE上進(jìn)行分析，預(yù)測(cè)到了10多個(gè)可能存在的元件。構(gòu)建了OsANKp：：GUS表達(dá)載體，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)化水稻獲得了一定數(shù)量的轉(zhuǎn)基因株系。
　　 轉(zhuǎn)基因植株可受機(jī)械損傷、稻縱卷葉螟、稻瘟病處理的誘導(dǎo)表達(dá)，并且隨著時(shí)間的增長(zhǎng)，GUS的表達(dá)強(qiáng)度也隨之增強(qiáng)。
　　 2、水稻稻瘟病抗性基因Pita啟動(dòng)子的功能分析：根據(jù)網(wǎng)上預(yù)測(cè)的水稻Pita基因設(shè)計(jì)引物從水稻(粳稻品種日本晴)中擴(kuò)增了該基因的啟動(dòng)子片

4、段，稱其為OsPITAp，將其啟動(dòng)子序列放在啟動(dòng)子順式作用元件預(yù)測(cè)網(wǎng)站PALCE上進(jìn)行分析，預(yù)測(cè)到了20多個(gè)可能存在的元件。構(gòu)建了OsPITAp：：GUS表達(dá)載體，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)化水稻獲得了一定數(shù)量的轉(zhuǎn)基因株系。
　　 在T1代OsPITAp轉(zhuǎn)基因植株中，莖和葉中沒有發(fā)現(xiàn)GUS基因的表達(dá)，根部有少量的表達(dá)，去殼的種子和谷殼中GUS基因也有少量的表達(dá)，本研究中轉(zhuǎn)基因植株對(duì)機(jī)械損傷、稻瘟病沒有應(yīng)答；GUS定量分析發(fā)現(xiàn)M