水稻oryzasatival.rsg6基因及其啟動子的表達研究

1、四川大學博士學位論文水稻（Oryza sativa L.）RSG6基因及其啟動子的表達研究姓名：蘭利瓊申請學位級別：博士專業(yè)：植物學指導教師：陳放20031101四川大學博士學位論文發(fā)揮作用。以R S G 6 基因的c D N A 中的一段與p a l 2 2 1 中的C a M V 3 5 S 啟動子連接，轉入植物表達載體p B ／' N 1 9 中構建反義表達載體p B I N l 9 - F a n 以及帶有報告基因的p

2、B I N l 9 一F a n ，G U S ，轉化農桿菌( A g r o b a c t e r i u mt u m e f a c i e n s ) E H A l 0 5 后，感染水稻愈傷組織，獲得了抗性愈傷組織，其得率分別是2 7 ％和2 1 ％，轉p B I N l 9 - F a n - G U S 的抗性愈傷組織經G U S 基因片段的P C R 檢測，陽性率為4 2 8 6 ％。另一方面，將R S G 6 基因全

3、長讀碼框與表達載體p B l l 2 1 連接構建了重組質粒p B I l 2 1 - R S G 6 ，轉化農桿菌，獲得了能夠使R S G 6 基因在其它植物中表達的農桿菌工程菌株，為進一步探討兄S G 6 基因的功能打下了基礎。利用已知的麟基因序列和G e n B a n k 中提供的R S G 6 前導序列設計引物，通過基因組D N A 的P C R 擴增得到兄S G 6 基因的上游片段，分析顯示其序列中含有大量的啟動子元件。通過

4、設計帶有酶切位點的引物擴增出缺失片段P S l 、P S 2 、P B l 、P B 2 ，利用質粒p B l 2 2 1 中的G 皤基因作為報告基因，最后與植物表達載體p l I N l 9 連接構建出重組質粒p B I N l 9 。G U S S l 、p a r N l 9 ．G U S S 2 、p B I N l 9 - G U S B l 、p B I N l 9 - G U S B 2 以及陽性對照p B I N l 9

5、 - G U S ，利用農桿菌E H A l 0 5 轉化煙草( N i c o t i a n a t a b a c u mL ) 和水稻。通過在煙草葉片、成熟花粉和水稻愈傷組織中的瞬時表達，證實這四個缺失片段都具有啟動子功能。而且，這四個片段雖然不具有種屬特異性和組織特異性，但表現(xiàn)出啟動效率上的組織差異性，推測R S G 6 基因在不同組織和雄配子發(fā)育的不同階段中表達的差異性很可能就主要是源于其啟動子功能的組織差異性。在煙草的穩(wěn)定

6、轉化中，5 種重組質粒分別以4 4 ．9 8 ％、3 6 ．9 4 ％、4 2 ．1 3 ％、3 0 ．2 6 ％積3 4 ，2 6 ％的比例獲得轉基因幼苗。為進一步定量地研究腳6 基因上游序列的啟動子功能奠定了基礎。關鍵詞：水稻( O r y z a s a t i v a L ) ；精細胞；R S G 6 基因；R N A 原位雜交；免疫定位；啟動子；缺失片段；瞬時表達；穩(wěn)定表達：轉基因煙草；反義表達；正義表達載體；愈傷組織。I X