利用水稻啟動(dòng)子捕獲系篩選水稻胚發(fā)育相關(guān)基因的初步研究.pdf

1、福建師范大學(xué)碩士學(xué)位論文利用水稻啟動(dòng)子捕獲系篩選水稻胚發(fā)育相關(guān)基因的初步研究姓名：李素一申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：王鋒20090601中文文摘中文文摘水稻是世界上最重要的糧食作物，全球半數(shù)以上人口以此為主糧。作為單子葉植物分子生物學(xué)研究的模式植物，水稻的基因組小，與其他禾本科作物相比具有廣泛的共線性，因此對水稻的分子生物學(xué)的研究不僅能為培育優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)的水稻提供理論依據(jù)，也可以為其他禾本科作物如小麥、玉米等的基因

2、組研究提供借鑒。隨著水稻全基因組測序工作的完成，分離和研究水稻基因功能成為水稻功能基因組學(xué)研究的一項(xiàng)迫切而重要的任務(wù)。基因捕獲是一種利用反向遺傳學(xué)原理來研究植物基因功能的有效方法，近年來已被廣泛應(yīng)用于各種植物的基因分離，包括三種基本類型：增強(qiáng)子捕獲、啟動(dòng)子捕獲和基因捕獲。福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)遺傳工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室以秈稻為轉(zhuǎn)化受體，構(gòu)建啟動(dòng)子捕獲及T ．D N A 插入的雙元載體，轉(zhuǎn)化獲得了大量啟動(dòng)子捕獲及T ．D N A 插入突變體。本研究

3、通過對該T - D N A 插入突變體庫中2 6 5 3 個(gè)啟動(dòng)子捕獲系中的報(bào)告基因t 3 ．葡萄糖苷酸酶( p ．g l u c u r o n i d a s e ，g u s ) 表達(dá)活性檢測，篩選到6 1 個(gè)水稻啟動(dòng)子捕獲系( 包括水稻的不同組織器官根、莖、葉、花、穎殼、胚和胚乳) ，其中胚中有G U S 活性表達(dá)的有6 個(gè)。W 9 1 5 4 是一個(gè)胚傾向性表達(dá)的水稻啟動(dòng)子捕獲系，同時(shí)在莖中也有部分表達(dá)。我們以W 9 1 5

4、4 這個(gè)水稻啟動(dòng)子捕獲系為材料進(jìn)行了進(jìn)一步的研究。具體研究內(nèi)容和結(jié)果如下：一、水稻胚特異表達(dá)啟動(dòng)子捕獲系的篩選( 1 ) 對移栽的2 8 7 2 個(gè)T o 代水稻啟動(dòng)子捕獲系進(jìn)行了潮霉素抗性篩選，確定為陽性轉(zhuǎn)基因水稻株系為2 6 5 3 個(gè)，陽性率達(dá)到9 2 ．4 ％。( 2 ) 從T - D N A 插入突變體庫中篩選到6 1 個(gè)G U S 活性表達(dá)啟動(dòng)子捕獲系，其中胚中有G U S 活性表達(dá)的有6 個(gè)。二、水稻胚傾向表達(dá)啟動(dòng)子捕獲系

5、W 9 1 5 4 的獲得及其初步分析( 1 ) W 9 1 5 4 抗性基因分離比分析和S o u t h e r n 雜交表明：W 9 1 5 4 為單T - D N A 插入啟動(dòng)子捕獲系。( 2 ) 利用T A I L ．P C R 擴(kuò)增獲得W 9 1 5 4 的側(cè)翼序列，其側(cè)翼序列B L A S T 分析發(fā)現(xiàn)，T o D N A 插入在的一個(gè)未知蛋白基因( B A F l 3 6 1 6 ．1 ) 的第2 個(gè)內(nèi)含子內(nèi)，該未知蛋白