丹參psbD基因啟動子初步研究.pdf

1、丹參(Salvia miltiorrhiza Bunge.)根莖是我國傳統(tǒng)中藥材，具有較高藥用價值。目前丹參藥材主要以人工種植滿足市場需求，但時常遭受季節(jié)性干旱造成死苗或影響產(chǎn)量。研究已發(fā)現(xiàn)，丹參葉綠體對中度以上干旱非常敏感，常造成光合作用功能下降，但其機理不清楚。
　　光系統(tǒng)Ⅱ具有吸取光能、引發(fā)電荷分離、傳遞電子并且催化水分解功能。D2蛋白是組成光系統(tǒng)Ⅱ復合體的核心之一，研究其編碼的psbD基因，對揭示丹參光合作用機理具有重要意

2、義。本研究選取陜西天士力公司提供的優(yōu)良丹參SH-B，對psbD基因上游1355bp片段進行克隆，并以全長啟動子為模板設計出5'端缺失啟動子片段，再分別與報告基因GUS相融合，構建多個表達載體，使用GV3101農(nóng)桿菌浸染本氏煙草葉片，分析各啟動子片段瞬時表達差異，從而驗證psbD基因啟動子功能，旨在為后續(xù)研究丹參響應干旱脅迫的光合作用機理及與育性之間的關系奠定基礎。取得的主要結果如下:
　　(1)以丹參葉綠體DNA為模板克隆了丹參p

3、sbD基因上游啟動子區(qū)(1355bp)。在PLACE網(wǎng)站上分析全長啟動子，發(fā)現(xiàn)含有多個與外部環(huán)境有關的順式作用元件，如CAAT-box、ATCA-motif、MBS等。
　　(2)用Primer5.0設計特異引物，以全長啟動子為模板，克隆出1147bp，891bp，746bp，582bp，451bp，323bp，230bp，142bp8個5'端缺失片段。將全長啟動子以及8個5'端啟動子缺失序列與去除CaMV35S啟動子的pCAMB

4、IA1304連接，成功構建出表達載體，按序列長度分別定名為:SalP-1355、SalP-1147、SalP-891、SalP-746、SalP-582、SalP-451、SalP-323、SalP-230、SalP-142。
　　(3)將已構建好的表達載體轉(zhuǎn)導GV3101農(nóng)桿菌，瞬時轉(zhuǎn)染本氏煙草葉片，對葉片進行GUS染色分析，結果顯示，全長啟動子以及各5'端缺失啟動子均可驅(qū)動GUS基因表達，且各啟動子活性有明顯差異。