茶樹花特異表達啟動子-花粉壁蛋白基因啟動子表達研究.pdf

1、組織特異性啟動子常常具有特異性調(diào)控元件，這些元件與反式作用因子的互作使基因只在特定的組織和器官以及特定的生長發(fā)育階段才進行表達。隨著植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)的廣泛應(yīng)用，快速分離和鑒定植物體內(nèi)各種特異啟動子已經(jīng)成為植物基因工程研究的熱點和難點。茶樹從花芽形成到種子成熟，共經(jīng)過約一年半左右的時間，從而消耗了大量的養(yǎng)分。因此，控制茶樹的生殖生長、促進營養(yǎng)生長是提高茶樹產(chǎn)量和品質(zhì)的關(guān)鍵。
　　 在茶樹花粉連續(xù)發(fā)育的過程中，始終都存在調(diào)控不同特異基

2、因表達的啟動子，本研究，以茶樹龍井43鮮葉為材料，利用PCR及克隆技術(shù)獲得茶樹Cpcp啟動子片段，并將其連接到真核表達載體PBI121上，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將其轉(zhuǎn)化到各受體植株的不同組織和器官，通過對與茶樹Cpcp啟動子融合在一起的GUS報告基因的活性檢測，從而分析該啟動子在植物各組織和器官的表達活性，并以期利用茶樹Cpcp啟動子表達的特異性在抑制茶樹的生殖生長、促進營養(yǎng)生長及創(chuàng)造雄性不育等方面提供研究基礎(chǔ)。通過研究取得以下結(jié)果：

3、　　 （1）茶樹Cpcp啟動子真核表達載體的構(gòu)建。
　　 根據(jù)GenBank中茶樹PCP的cDNA序列（登錄號：EF116920，492 bp）及茶樹Cpcp啟動子序列（登錄號：EU255276，360 bp）設(shè)計引物，應(yīng)用PCR技術(shù)從茶樹中克隆出Cpcp啟動子片段，構(gòu)建了真核表達載體pBI-Cpcp，成功地將該雙元表達載體導(dǎo)入根癌農(nóng)桿菌，從而獲得含有茶樹Cpcp啟動子的工程菌。
　　 （2）茶樹Cpcp啟動子表達活性

4、的測定。
　　 通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的瞬時表達，對茶樹（櫧葉種）、絲瓜、一串紅、木槿、油菜中根、莖、葉、花瓣、花藥、花柱和種子等部位進行化學(xué)組織染色并對油菜在葉、根、莖、花瓣、花藥等部位進行GUS熒光定量檢測，結(jié)果表明，茶樹Cpcp啟動子足以驅(qū)動GUS酶的表達，并且在花粉的表達有很強的特異性。
　　 （3）茶樹Cpcp啟動子穩(wěn)定遺傳體系的建立。
　　 利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤轉(zhuǎn)化法，將構(gòu)建的茶樹Cpcp啟動子真核表達載體成