小麥儲藏蛋白基因Avenin-like b啟動子的表達(dá)特性研究.pdf

1、小麥?zhǔn)鞘澜缟现匾募Z食作物之一，也是我國的第二大糧食作物。每年全世界小麥總產(chǎn)量約為6億噸，能為全球35％以上的人口提供每日所需的蛋白質(zhì)和熱量。
　　 小麥加工品質(zhì)與儲藏蛋白的組分緊密相關(guān)，因此，利用基因工程手段將優(yōu)質(zhì)儲藏蛋白基因?qū)胄←溤耘嗥贩N以改良其品質(zhì)，是當(dāng)前小麥遺傳育種的主要課題。而獲得能驅(qū)動優(yōu)質(zhì)儲藏蛋白基因在小麥胚乳中專一且高效表達(dá)的啟動子，將會為這一目標(biāo)的實(shí)現(xiàn)提供保證。本研究利用缺失突變結(jié)合遺傳轉(zhuǎn)化手段，對已分離到的小

2、麥新型儲藏蛋白基因avenin-like b胚乳特異性啟動子驅(qū)動的gus報(bào)告基因的表達(dá)特性進(jìn)行了分析研究，具體研究結(jié)果如下：
　　 （1）運(yùn)用本實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)構(gòu)建好的此啟動子不同長度缺失真核表達(dá)載體，即分別以該啟動子全長的3，為起點(diǎn)，逐步向上游截取300bp、600bp、800bp、1000bp、1700bp序列構(gòu)建成pALP-3、pALP-6、pALP-8、pAL9P-10、pALP-17真核表達(dá)載體。通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化技術(shù)，將這五個(gè)

3、載體轉(zhuǎn)化煙草，經(jīng)PCR檢測，獲得了陽性轉(zhuǎn)基因植株。
　　 （2）陽性植株經(jīng)GUS組織化學(xué)染色，證實(shí)avenin-like啟動子在空間上是胚乳特異性表達(dá)的，進(jìn)一步證實(shí)了該啟動子-1228bp的GCN4-motif、-825bp以及-1231bp的Skn-Ⅰmotif的胚乳特異性表達(dá)元件的作用。
　　 （3）經(jīng)過熒光定量分析，轉(zhuǎn)化質(zhì)粒pALP-3、pALP-6、pALP-8、pALP-10、pALP-17陽性植株的平均表達(dá)活