龍葵蛋白酶抑制劑Ⅱb基因啟動(dòng)子的活性分析.pdf

1、　　龍葵蛋白酶抑制劑Ⅱb基因(SaPIN2b)是龍葵蛋白酶抑制劑Ⅱ基因家族中的一員，編碼一種絲氨酸型蛋白酶抑制劑。雖然，SaPIN2b與SaPIN2家族中的另外一員SaPIN2a在cDNA水平和推測(cè)的氨基酸水平上都有著相當(dāng)高的同源性，但在表達(dá)模式上卻大不相同。SaPIN2b在葉中受創(chuàng)傷誘導(dǎo)表達(dá)，而SaPIN2a除受誘導(dǎo)表達(dá)外，還組成型地在韌皮部中特異表達(dá)。　　本研究中使用了5’cDNA末端快速擴(kuò)增法(rapidamplificatio

2、nof5’cDNAends，5'RACE)來確定SaPIN2b的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)。測(cè)序結(jié)果表明，SaPIN2b的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)位于翻譯起始密碼子上游的第30個(gè)堿基處。　　本研究發(fā)現(xiàn)，SaPIN2b啟動(dòng)子能驅(qū)使GUS(B-葡萄糖苷酸酶)報(bào)告基因在原核生物根癌農(nóng)桿菌中表達(dá)?！　榱搜芯縎aPIN2b啟動(dòng)子在植物中的表達(dá)模式，本研究利用已構(gòu)建好的雙元載體PPsaPIN2b：GUS(1.42kbSaPIN2b啟動(dòng)子融合到GUS基因上游)分別轉(zhuǎn)化龍

3、葵、煙草和水稻，獲得轉(zhuǎn)基因植株，對(duì)GUS在轉(zhuǎn)基因植物中的表達(dá)情況進(jìn)行了分析?！　US組織化學(xué)染色分析表明，SaPIN2b啟動(dòng)子能驅(qū)使報(bào)告基因在轉(zhuǎn)基因龍葵和煙草的排水器(hydathodes)和腺體分泌型毛狀體中特異表達(dá)，在植物的整個(gè)生長(zhǎng)階段都是如此?！　榱藢ふ襍aPIN2b啟動(dòng)子特異性表達(dá)的順式作用元件，本研究對(duì)含6個(gè)不同的啟動(dòng)子5’序列缺失SaPIN2b：GUS融合基因的轉(zhuǎn)基因煙草葉進(jìn)行了GUS組織化學(xué)染色分析和GUS活性熒光