龍葵蛋白酶抑制劑Ⅱb基因啟動子的活性分析.pdf

1、　　龍葵蛋白酶抑制劑Ⅱb基因(SaPIN2b)是龍葵蛋白酶抑制劑Ⅱ基因家族中的一員，編碼一種絲氨酸型蛋白酶抑制劑。雖然，SaPIN2b與SaPIN2家族中的另外一員SaPIN2a在cDNA水平和推測的氨基酸水平上都有著相當高的同源性，但在表達模式上卻大不相同。SaPIN2b在葉中受創(chuàng)傷誘導表達，而SaPIN2a除受誘導表達外，還組成型地在韌皮部中特異表達?！　”狙芯恐惺褂昧?’cDNA末端快速擴增法(rapidamplificatio

2、nof5’cDNAends，5'RACE)來確定SaPIN2b的轉錄起始位點。測序結果表明，SaPIN2b的轉錄起始位點位于翻譯起始密碼子上游的第30個堿基處?！　”狙芯堪l(fā)現(xiàn)，SaPIN2b啟動子能驅使GUS(B-葡萄糖苷酸酶)報告基因在原核生物根癌農(nóng)桿菌中表達?！　榱搜芯縎aPIN2b啟動子在植物中的表達模式，本研究利用已構建好的雙元載體PPsaPIN2b：GUS(1.42kbSaPIN2b啟動子融合到GUS基因上游)分別轉化龍

3、葵、煙草和水稻，獲得轉基因植株，對GUS在轉基因植物中的表達情況進行了分析?！　US組織化學染色分析表明，SaPIN2b啟動子能驅使報告基因在轉基因龍葵和煙草的排水器(hydathodes)和腺體分泌型毛狀體中特異表達，在植物的整個生長階段都是如此。　　為了尋找SaPIN2b啟動子特異性表達的順式作用元件，本研究對含6個不同的啟動子5’序列缺失SaPIN2b：GUS融合基因的轉基因煙草葉進行了GUS組織化學染色分析和GUS活性熒光