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文檔簡介
1、 本研究在大腸桿菌中表達(dá)了GST-SaPIN2b融合蛋白，嘗試得到具有生物學(xué)活性的蛋白質(zhì)，并使用表達(dá)的融合蛋白制備SaPIN2b抗體。融合蛋白在大腸桿菌中大部分以包涵體的形式大量表達(dá)，以融合蛋白作為抗原通過免疫兔子得到了抗體，經(jīng)過鑒定，抗體的專一性和效價都比較高。 本研究將SaPIN2a和SaPIN2b兩種cDNA分別在轉(zhuǎn)基因煙草中過量表達(dá)，得到轉(zhuǎn)基因煙草。通過分子雜交和酶學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，異源表達(dá)的SaPIN2a和SaPIN2
2、b蛋白仍具有抑制劑活性。轉(zhuǎn)基因煙草的總蛋白粗提液比野生煙草總蛋白粗提液具有針對胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶強(qiáng)得多的抑制活性，這表明這兩種蛋白都具有針對胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的抑制能力。本研究還用SaPIN2a和SaPIN2b轉(zhuǎn)基因煙草喂養(yǎng)斜紋夜蛾(Spodopteralitura)，初步評估了這兩種基因的抗蟲能力。 本研究還構(gòu)建了SaPIN2b的RNA干涉載體，轉(zhuǎn)化龍葵，使轉(zhuǎn)基因龍葵中的SaPIN2b基因表達(dá)沉默，用以研究SaPIN2
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