甜蛋白基因Brazzein在大腸桿菌中的表達(dá)及對(duì)生菜和煙草的遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文甜蛋白基因Brazzein在大腸桿菌中的表達(dá)及對(duì)生菜和煙草的遺傳轉(zhuǎn)化姓名：蔣迪申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：果樹(shù)學(xué)指導(dǎo)教師：陳大明2002.5.22浙江火學(xué)瑣L學(xué)位論文(2002)LBA4404和GV3101：pMP90中，得到表達(dá)的菌株。3無(wú)菌萌發(fā)的4日齡生菜(品種“北th=號(hào)”)子葉切去尖端和基部，采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤(pán)轉(zhuǎn)化法，用構(gòu)建好的植物表達(dá)載體對(duì)生菜進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化。外植體在無(wú)抗生素的誘芽培養(yǎng)基(MS01mg／l6BA

2、01mg／lNAA)中暗培養(yǎng)三天后，移入加入抗生素100mg／LKan和500mg／LCr的誘芽培養(yǎng)基，于組培室中進(jìn)行誘芽和抗性篩選。分化出的不定芽切下半張葉片進(jìn)行GUS染色，呈陽(yáng)性的植株從外植體上切下，在生根培養(yǎng)基(MsO05mg／LNAA50mg／LKarl)中誘導(dǎo)根的形成。植株形成根后，先后移入蛭石和營(yíng)養(yǎng)土中培養(yǎng)。組培室中煉苗后，移入溫室自然光照條件下生長(zhǎng)。取成年植株的葉片提取基因組DNA，進(jìn)行PCR擴(kuò)增鑒定。本論文中獲得的再生生

3、菜植株通過(guò)GUS染色和PCR擴(kuò)增，證明導(dǎo)入了外源mBrazzein基因。轉(zhuǎn)基因植株在溫室中丌花，結(jié)子，已得到了轉(zhuǎn)基因生菜植株的種子。4以煙草(品種SR1)無(wú)菌苗葉片為外植體，采用農(nóng)桿菌浸染的葉盤(pán)轉(zhuǎn)化法，用構(gòu)建好的植物表達(dá)載體對(duì)煙草進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化。外植體置于無(wú)抗生素的誘芽培養(yǎng)基(MS05mg／16BA)上暗培養(yǎng)3天后，移入加有抗生素150mg／lKan和500mg／LCr的誘芽培養(yǎng)基上誘導(dǎo)不定芽的分化。抗性芽經(jīng)GUS染色，呈陽(yáng)性的植株移入生