黃牛脂聯(lián)素基因遺傳特性及在大腸桿菌中的表達(dá)研究.pdf

1、本研究采用PCR-SSCP和DNA測(cè)序技術(shù)，檢測(cè)了南陽(yáng)牛、秦川牛、郟縣紅牛、晉南牛、中國(guó)荷斯坦牛5個(gè)群體的脂聯(lián)素基因(Acrp30)的遺傳變異，分析了其遺傳結(jié)構(gòu)和遺傳多樣性，并對(duì)南陽(yáng)牛、秦川牛和郟縣紅牛3個(gè)群體該基因的多態(tài)基因座與其生長(zhǎng)性狀進(jìn)行了關(guān)聯(lián)分析，以檢驗(yàn)該基因的多態(tài)基因型對(duì)3個(gè)黃牛群體生長(zhǎng)發(fā)育的遺傳效應(yīng)，以期發(fā)現(xiàn)對(duì)重要經(jīng)濟(jì)性狀具有顯著效應(yīng)的遺傳標(biāo)記，為中國(guó)黃牛的高效選育和分子標(biāo)記數(shù)據(jù)庫(kù)的建立、種質(zhì)資源保存與利用提供遺傳學(xué)依據(jù)。此

2、外，對(duì)秦川牛脂聯(lián)素基因進(jìn)行了體外克隆、表達(dá)研究，為進(jìn)一步的功能研究奠定了基礎(chǔ)。本研究獲得了以下結(jié)果： 1.脂聯(lián)素基因多態(tài)性及其與南陽(yáng)牛、秦川牛、郟縣紅牛生長(zhǎng)性狀的關(guān)聯(lián)分析共研究了5個(gè)群體的6個(gè)基因座。在內(nèi)含子2新發(fā)現(xiàn)2個(gè)SNP(+822 C>T和+866C>T，以起始密碼子ATG中的A作為+1來(lái)定義序列的相對(duì)位置，下同)，3’側(cè)翼區(qū)新發(fā)現(xiàn)1個(gè)SNP。5個(gè)牛群體Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)結(jié)果表明，內(nèi)含子2上的SNP位點(diǎn)處

3、于非平衡狀態(tài)。多態(tài)信息含量分析結(jié)果表明，除內(nèi)含子2(+822 C>T)為中度多態(tài)外，其它位點(diǎn)均為低度多態(tài)?；蛐头植嫉目ǚ姜?dú)立性檢驗(yàn)顯示，在內(nèi)含子2基因型分布差異比較大，各品種間均差異極顯著(P<0.01.)，3’側(cè)翼區(qū)基因型分布在各品種間差異均不顯著(P<0.05.)。在編碼區(qū)未發(fā)現(xiàn)SNP。利用最小二乘擬合線性模型，對(duì)：內(nèi)含子2和3’側(cè)翼區(qū)多態(tài)位點(diǎn)不同基因型與黃牛部分經(jīng)濟(jì)性狀進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，結(jié)果表明，不同基因型與南陽(yáng)牛、秦川牛和郟縣紅

4、牛3個(gè)群體的經(jīng)濟(jì)性狀無(wú)顯著關(guān)聯(lián)。 2.脂聯(lián)素基因啟動(dòng)子區(qū)多態(tài)性及其序列分析在啟動(dòng)子區(qū)3個(gè)基因座中，在P1基因座(-9862.-10333)新發(fā)現(xiàn)5個(gè)點(diǎn)突變(-10241G>T、-10171 C>T、-10007 G>C、-9886 C>T、-9936 C>G)以及1處插入突變(-9940-9939 ins 67bp)。在P3基因座(-10598.-11080)新發(fā)現(xiàn)1個(gè)點(diǎn)突變(-10997 C>T)以及1處缺失突變(-10744

5、-10740 delGATTA)。對(duì)P1和P3基因座的插入和缺失基因型分布的卡方獨(dú)立性檢驗(yàn)顯示，奶牛與檢測(cè)的地方黃牛存在顯著差異(P<0.05)，但各群體在兩個(gè)位點(diǎn)的PIC均小于0.20。通過(guò)對(duì)啟動(dòng)子區(qū)的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)的分析發(fā)現(xiàn)，在P1基因座存在一個(gè)固醇調(diào)節(jié)元件相關(guān)蛋白(SREBP)結(jié)合位點(diǎn)，兩個(gè)過(guò)氧化物酶體增殖物活化受體(PPAR)的結(jié)合位點(diǎn)以及一個(gè)碳水化合物反應(yīng)元件(ChRE)。在P3基因座存在兩個(gè)增強(qiáng)子結(jié)合蛋白(C/EBP)的結(jié)

6、合位點(diǎn)及過(guò)氧化物酶體增殖物活化受體(PPAR)的結(jié)合位點(diǎn)。通過(guò)序列分析發(fā)現(xiàn)，P1位點(diǎn)的插入序列實(shí)際上造成了一個(gè)可變拷貝，在這個(gè)插入序列中包含了一個(gè)碳水化合物反應(yīng)元件(ChRE)，而P3位點(diǎn)的缺失突變則導(dǎo)致一個(gè)增強(qiáng)子結(jié)合蛋白(C/EBP)結(jié)合位點(diǎn)的產(chǎn)生。 3.秦川牛脂聯(lián)素基因的克隆、表達(dá)本試驗(yàn)利用Overlap-PCR技術(shù)首次擴(kuò)增獲得秦川牛脂聯(lián)素基因全長(zhǎng)CDS序列。脂聯(lián)素基因編碼區(qū)全長(zhǎng)為723 bp，與GenBank公布序列的同源