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文檔簡介
1、甲狀旁腺激素(PTH)是由甲狀旁腺分泌的一種重要的肽類調(diào)節(jié)激素,在機(jī)體的鈣磷代謝,骨的形成、分化和發(fā)育等相關(guān)的諸多環(huán)節(jié)中起著關(guān)鍵性作用。甲狀旁腺激素分子中含有84個氨基酸。 近年的研究表明,間歇地小劑量給予PTH可促進(jìn)骨的合成代謝,因此在治療骨質(zhì)疏松方面被認(rèn)為是最具前景的藥物。研究表明PTH(1-34)具有與PTH(1-84)相同的生物功能。據(jù)此本研究利用基因工程生產(chǎn)用于治療骨質(zhì)疏松癥的重組的人甲狀旁腺激素(1-34)。
2、 利用基因重組技術(shù)將人PTH(1-34)基因克隆到表達(dá)載體pThioHisA中。重組的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化到E.coliBL21(DE3)和DH5α中,經(jīng)異丙醇-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)誘導(dǎo)表達(dá)。得到融合表達(dá)蛋白。經(jīng)條件優(yōu)化后,Western-blot分析證實(shí)得到了重組人甲狀旁腺激素rhPTH(1-34)。經(jīng)硫酸銨沉淀法純化后將目的蛋白作用于3T3細(xì)胞,結(jié)果顯示該蛋白可以刺
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