sIL-16在大腸桿菌中的表達及活性測定.pdf

1、用PCR法擴增本室保存的sIL-16 cDNA片段,選擇NdeI和XhoI兩個酶切位點定向插入含T7啟動子同時帶有6個組氨酸序列表達標(biāo)簽的載體pET28a(+)中構(gòu)建重組質(zhì)粒pET-sIL16,得到陽性克隆后轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3),篩選表達菌株.觀察不同溫度下菌株經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達產(chǎn)物可溶情況,選擇最適宜溫度進行表達.表達產(chǎn)物超聲碎菌,離心后上清過Ni<'2+>鏊和層析柱,根據(jù)咪唑梯度變化進行表達產(chǎn)物的純化.表達產(chǎn)物與淋巴細(xì)胞共

2、同孵育一段時間,通過流式細(xì)胞儀觀察它對細(xì)胞表面某些分子表達的影響和它對細(xì)胞生長的刺激作用.結(jié)論:從培養(yǎng)的淋巴細(xì)胞提取IL-16 RNA,經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄成cDNA后,利用高效表達載體pET28a(+)在sIL-16的N端添加了6個組氨酸的標(biāo)簽,同時受控于T7啟動子的調(diào)控下,使蛋白得以高效表達并方便純化.進行低溫誘導(dǎo)減弱蛋白分子表面疏水基的相互作用,有利于蛋白正確折疊形成可溶性天然的空間結(jié)構(gòu).與rIL-16共孵育的PBMC表面IL-2R的表達水平