重組EpoAB-NGF模擬肽在大腸桿菌中的表達(dá)、純化及生物活性初步研究.pdf

1、紅細(xì)胞生成素(Epo)最先作為一個(gè)促進(jìn)紅細(xì)胞生成的生長(zhǎng)因子被確認(rèn),后來(lái)發(fā)現(xiàn)其在神經(jīng)、血管等系統(tǒng)中具有不依賴于紅細(xì)胞生成作用的細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)保護(hù)功能,并且這種營(yíng)養(yǎng)保護(hù)作用已經(jīng)被定位到了其序列中一個(gè)由17個(gè)氨基酸組成的多肽順序上,稱作EpoAB肽(AEHCSLNENITVPDTKV)。
　　 神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)可通過(guò)結(jié)合靶細(xì)胞膜上的高/低親和力受體(Trk/p75NTR)調(diào)控神經(jīng)元的存活、增殖、分化、突觸生長(zhǎng)和凋亡等生命過(guò)程,有較好的

2、臨床應(yīng)用前景。本室利用構(gòu)建的表達(dá)p75NTR的R2L1凋亡細(xì)胞模型和噬菌體展示文庫(kù)篩選出2個(gè)有抗凋亡作用的p75NTR的模擬配基,即NGF的模擬肽(NGF9和NGF12)。
　　 本研究在前期工作的基礎(chǔ)上,構(gòu)建了原核表達(dá)GST-EpoAB-NGF9/12融合蛋白的重組質(zhì)粒,篩選相應(yīng)的表達(dá)菌株,優(yōu)化了表達(dá)和純化條件,獲得融合蛋白,并通過(guò)刺激PC12細(xì)胞軸突生長(zhǎng)和抑制R2L1細(xì)胞去血清凋亡的實(shí)驗(yàn),初步證實(shí)了融合蛋白對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)保