重組人Hexastatin蛋白在大腸桿菌中的可溶性表達(dá)及蛋白純化.pdf

1、血管發(fā)生是從已有的血管中形成新生的管道，它對(duì)于生物體內(nèi)很多正常的生理過程來說是至關(guān)重要的。1971年Folkman提出了著名的“腫瘤饑餓療法”，即腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移離不開新生血管的形成，氧氣從血管中擴(kuò)散的最大限值是150μm，通過抑制腫瘤新生血管的形成，阻斷腫瘤細(xì)胞賴以生存的氧氣及營(yíng)養(yǎng)供給，腫瘤細(xì)胞便會(huì)發(fā)生凋亡。此學(xué)說的提出為腫瘤的生物治療提供了新的策略，尋找內(nèi)源性的血管生成抑制因子成為近年來研究的熱點(diǎn)。
　　 Hexastati

2、n來源于細(xì)胞外基質(zhì)，是Ⅳ型膠原蛋白α6鏈的非膠原區(qū)NC1，由229個(gè)氨基酸組成，分子量是25 kD。近年來研究表明Hexastatin可以通過一種RGD非依賴方式與整合素分子αvβ3結(jié)合，調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞的黏附和遷移，并且劑量依賴性地抑制內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，對(duì)新生血管的生成起到顯著的抑制作用。另外，實(shí)體瘤實(shí)驗(yàn)證實(shí)Hexastatin還能有力地抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，它在癌組織中含量的下調(diào)可以作為腫瘤浸潤(rùn)的重要指標(biāo)，起到提前預(yù)警的作用。
　　

3、 本研究從人食管癌EC9706細(xì)胞中克隆出Hexastatin基因，在大腸桿菌中進(jìn)行了可溶性表達(dá)，并利用麥芽糖結(jié)合蛋白（Maltose Binding Protein，MBP）可專一性結(jié)合于直鏈淀粉（Amylose）親和樹脂的特性，對(duì)表達(dá)產(chǎn)物作了進(jìn)一步的純化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：經(jīng)PCR擴(kuò)增成功獲得了687 bp的人Hexastatin基因，測(cè)序正確，重組人Hexastatin基因在BL21菌體中獲得了高效可溶性表達(dá)，表達(dá)的可溶性蛋白占總蛋白量的