分子伴侶促進(jìn)截短型人乳頭瘤病毒58亞型L1蛋白在大腸桿菌中的可溶性表達(dá).pdf

1、人乳頭瘤病毒（Human Papillomavirus，HPV）為雙鏈環(huán)狀DNA病毒，具有多種亞型，根據(jù)感染后引起病變的差異，將其分為低危型和高危型，它通過(guò)感染人體的表皮和粘膜鱗狀上皮進(jìn)而引發(fā)尋常疣、扁平疣、外陰癌、前列腺癌、口腔癌、宮頸癌等疾病。其中HPV58亞型屬于高危型，與宮頸癌等的發(fā)生密切相關(guān)。在亞洲地區(qū)宮頸病變的婦女中，HPV58亞型的感染率很高，嚴(yán)重威脅著廣大女性的健康，然而國(guó)內(nèi)HPV疫苗研究相對(duì)落后，目前尚沒(méi)有成熟的疫苗產(chǎn)

2、品，只有葛蘭素史克（Glaxosmithkline，GSK）的HPV二價(jià)（HPV16/18）疫苗在中國(guó)上市，我國(guó)又是宮頸癌高發(fā)國(guó)家，迫切需求自主研發(fā)有效的HPV58疫苗。本課題旨在研究一種高效、廉價(jià)的HPV58 L1蛋白表達(dá)系統(tǒng)，為進(jìn)一步制備HPV58預(yù)防性疫苗奠定基礎(chǔ)。
　　本研究將含有分子伴侶的質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌（Escherichia coli，E.coli）BL21感受態(tài)細(xì)胞內(nèi)，制備含有分子伴侶pTf16的E.coli BL

3、21感受態(tài)細(xì)胞，再將含有重組表達(dá)載體 pGEX-6P-HPV58-L1的質(zhì)粒轉(zhuǎn)入上述感受態(tài)細(xì)胞，構(gòu)建重組共表達(dá)菌株，經(jīng)初步誘導(dǎo)表達(dá)證實(shí)，重組蛋白GST-HPV58 L1與分子伴侶pTf16可實(shí)現(xiàn)表達(dá)，可溶性分析結(jié)果顯示分子伴侶能夠顯著促進(jìn)重組蛋白的可溶性表達(dá)；通過(guò)優(yōu)化IPTG濃度、誘導(dǎo)溫度、L-阿拉伯糖濃度與L-阿拉伯糖誘導(dǎo)時(shí)間，篩選出最佳表達(dá)條件：加入2.0 mg/ml的L-阿拉伯糖，37℃，220 rpm誘導(dǎo)表達(dá)20 min；再加入

4、1.0 mmol/L的IPTG，18℃，誘導(dǎo)表達(dá)24 h。將獲得的重組蛋白經(jīng)GST親和層析柱純化，采用Prescission Protease酶切去除GST標(biāo)簽，經(jīng)SDS-PAGE與Western blot鑒定結(jié)果顯示，約在50 KD處出現(xiàn)截短型HPV58 L1蛋白的特異性條帶，其純度可達(dá)90％以上。將獲得的截短型HPV58 L1蛋白免疫昆明小鼠，經(jīng)ELISA檢測(cè)血清效價(jià)，結(jié)果顯示，不同小鼠個(gè)體間免疫應(yīng)答水平存在一定差異，無(wú)論是高免疫劑