可溶性重組脂聯(lián)素融合蛋白（GST-gAD）在大腸桿菌中的優(yōu)化表達(dá)及其生物活性鑒定.pdf

1、目的：探討可溶性重組脂聯(lián)素球狀結(jié)構(gòu)域融合蛋白(GST-gAD)在大腸桿菌中的表達(dá)及其抑制人乳腺癌細(xì)胞MDA—MB-231增殖的生物學(xué)活性。 方法：①用CaCl2法制備感受態(tài)細(xì)菌JM109，質(zhì)粒pGEX—KG—gAD轉(zhuǎn)化大腸桿菌JM109，空載質(zhì)粒pGEX—KG作為內(nèi)對(duì)照同時(shí)轉(zhuǎn)化JM109，篩選建株；②以正交設(shè)計(jì)軟件正交設(shè)計(jì)助手Ⅱ選擇L9(34)正交設(shè)計(jì)表在三個(gè)水平，四個(gè)因素(IPTG濃度，誘導(dǎo)時(shí)間，誘導(dǎo)溫度，細(xì)菌密度OD600

2、)下確定優(yōu)化表達(dá)的最佳組合條件；③親和層析法純化GST—gAD；④用MTT法檢測(cè)融合蛋白GST—gAD對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MDA—MB-231增殖的影響。 結(jié)果：①重組質(zhì)粒pGEX—KG—gAD成功轉(zhuǎn)化大腸桿菌JM109；②對(duì)GSI-gAD誘導(dǎo)表達(dá)影響最大的因素為溫度，最佳誘導(dǎo)表達(dá)組合條件為溫度32℃，IPTG的濃度1.0 mmol/L，誘導(dǎo)前細(xì)菌的生長密度OD6001.0，誘導(dǎo)表達(dá)時(shí)間1.5h，此條件下其表達(dá)量占菌體總蛋白的6％左