野桑蠶羧酸酯酶基因的克隆及在大腸桿菌中的表達(dá).pdf_第1頁(yè)
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1、根據(jù)NCBI上的家蠶羧酸酯酶基因序列(GenBank登錄號(hào)DQ443360)設(shè)計(jì)引物，提取野桑蠶中腸的RNA，采用RT-PCR方法，克隆了野桑蠶羧酸酯酶基因(GenBank登錄號(hào)：EF157830)。序列分析表明，該基因的ORF為1923 bp，編碼641個(gè)氨基酸，預(yù)測(cè)其相對(duì)分子質(zhì)量約為71.7 kD，等電點(diǎn)為4.82。野桑蠶羧酸酯酶核苷酸序列及推導(dǎo)的氨基酸序列經(jīng)與家蠶同源比較發(fā)現(xiàn)兩者有33個(gè)堿基、12個(gè)氨基酸的差異，核苷酸和氨基酸同源

2、性分別達(dá)到98.3％和98.6％。經(jīng)與桃蚜(Myzus persicae)、果蠅(Drosophilaps Pseudoobscura)、棉鈴蟲(Helicoverpa armigera)等進(jìn)行同源性比較發(fā)現(xiàn)不同昆蟲間酯酶的同源性較低，但是它們都具備在酯酶活性中心位置，二硫鍵形成位點(diǎn)處存在高度保守的氨基酸序列的特征，因此推測(cè)其可能與昆蟲抗性相關(guān)。 將野桑蠶羧酸酯酶基因克隆進(jìn)原核表達(dá)載體pET-28a(+)，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21

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