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文檔簡介
1、本文對牦牛Ⅰ型干擾素基因的克隆及其在大腸桿菌中進(jìn)行了表達(dá)分析。本研究依照各基因開放閱讀框(ORF)兩側(cè)序列重新設(shè)計并合成表達(dá)引物，以重組質(zhì)粒pGEM-T-easy/IFN-α-A、pGEM-T-easy/IFN-α-Ⅱ、pGEM-T-easy/IFN-β為模板進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物和pGEX-4T-1質(zhì)粒分別用BamHⅠ和XholⅠ、BamHⅠ和EcoRⅠ、BamHI和EcoRⅠ雙酶切后連接，轉(zhuǎn)化大腸桿菌。經(jīng)酶切、PCR以及測序鑒定證明，牦
2、牛各基因正確插入到pGEX-4T-1載體。用ITPG誘導(dǎo)重組基因進(jìn)行表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物通過SDS-PAGE和Western-blotting分析，證實牦牛IFN-α-A、IFN-α-Ⅱ和IFN-β基因均在大腸桿菌中均得到了成功表達(dá)，目的蛋白與GST形成融合形式，IFN-α-A和IFN-α-Ⅱ分子量大小約為19ku左右，IFN-β分子量大小約為15ku左右，與預(yù)期的大小相吻合，而且可被鼠抗GST血清所識別；薄層掃描分析表明，表達(dá)產(chǎn)物約占菌體總
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