甘薯病毒G（SPVG）外殼蛋白基因的克隆、序列分析及在大腸桿菌中的表達(dá).pdf

1、甘薯是我國四大主要糧食作物之一，也是重要的飼料和輕工業(yè)原料，在我國分布廣泛。未來對糧食日益增長的需求和甘薯自身的產(chǎn)量高、適應(yīng)性廣等特點(diǎn)將使甘薯置身于優(yōu)越的競爭地位。但由于甘薯病毒病的廣泛存在，嚴(yán)重影響了甘薯的產(chǎn)量和品質(zhì)。對甘薯病毒病的防治，目前尚無特別有效的化學(xué)方法，利用莖尖分生組織培養(yǎng)技術(shù)培育甘薯脫毒品種是防治甘薯病毒病最有效的方法，而明確侵染甘薯的主要病毒種類，制備特異性抗體，建立高效快速的病毒檢測技術(shù)是培育脫毒甘薯的關(guān)鍵。甘薯病毒

2、G(SweetPotatoVirusG，SPVG)是侵染甘薯的主要病毒之一，其常常與甘薯羽狀斑駁病毒(SPFMV)等其他potyvirus屬病毒混合侵染，導(dǎo)致甘薯產(chǎn)量降低、品質(zhì)變劣和種性退化，對甘薯生產(chǎn)造成嚴(yán)重危害。目前對SPVG的分子生物學(xué)還缺乏深入的研究，國內(nèi)也未見對SPVG的研究報道。本項(xiàng)研究將通過對SPVG外殼蛋白(CP)基因的克隆、序列分析，明確SPVG河南分離物與其他分離物之間的差異；并通過在大腸桿菌中表達(dá)CP基因，通過純化

3、蛋白、免疫家兔制備抗體，建立該病毒的快速檢測技術(shù)，為進(jìn)一步的研究奠定基礎(chǔ)。 根據(jù)已報道的SPVGCP基因的核苷酸序列設(shè)計引物，以感染SPVG的巴西牽牛(Ipomoeasetosa)葉片總RNA為模板，經(jīng)RT-PCR擴(kuò)增獲得SPVG河南分離物(SPVG-HN)CP基因的目的片段。將其克隆到pMD18-Tvector上，進(jìn)行序列測定。序列分析結(jié)果表明：SPVG-HNCP基因由1065個核苷酸組成(GenBank登錄號為DQ39986

4、1)，編碼355個氨基酸殘基。與GenBank中Egypt1(AJ515380)、LSU-1(AY178991)和LSU-3(AY178990)分離物的核苷酸序列相似性為98％左右，與中國廣東分離物SPVG-CH(X76944)和SPVG-CH2(Z83314)的相似性分別為98.1％和85.5％。說明SPVG-HN與SPVG-CH關(guān)系較近，而與SPVG-CH2關(guān)系較遠(yuǎn)。利用基因工程方法，將SPVG-HNCP基因克隆到原核表達(dá)載體pET