兩種甘薯病毒外殼蛋白基因表達(dá)載體的構(gòu)建及農(nóng)桿菌介導(dǎo)甘薯遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、甘薯（Ipomoea batatas(L)Lam.）是我國重要的糧食與經(jīng)濟(jì)作物，主要用于食品、蔬菜、飼料及工業(yè)等行業(yè)。中國是世界上最大的甘薯生產(chǎn)國，種植面積約達(dá)550萬公頃，產(chǎn)量約為1.06億噸左右。病毒病是導(dǎo)致甘薯產(chǎn)量降低和種性退化的主要原因之一，目前對甘薯病毒病尚無有效的防治方法。由于缺乏抗原材料、育種周期長及甘薯雜交不親和性等原因，使雜交育種培育抗病毒品種比較困難，所以應(yīng)用轉(zhuǎn)基因技術(shù)來培育抗病毒甘薯品種顯得尤為重要。已報(bào)導(dǎo)侵染甘薯

2、的病毒約有20種，甘薯羽狀斑駁病毒（SPFMV）和甘薯G病毒（SPVG）是其中兩種重要的病毒。本研究主要得到如下結(jié)果：
　　1、植物表達(dá)載體pCAMBIA1301VGCP的構(gòu)建
　　根據(jù) SPVG-HN（GenBank登錄號為 DQ399861）CP基因 cDNA序列設(shè)計(jì)引物SPVG-F/R，通過 RT-PCR得到目的基因并測序。測序結(jié)果表明擴(kuò)增的片段與報(bào)道的序列同源性為98.2％。同時(shí)雙酶切質(zhì)粒pMDVGCP與pCAMBI

3、A1301并將它們連接，成功構(gòu)建出植物表達(dá)載體pCAMBIA1301VGCP。
　　2、植物表達(dá)載體pCAMBIA1301VGCP對甘薯的轉(zhuǎn)化
　　以甘薯品種“臺農(nóng)71”與“紫羅蘭”的莖段為受體，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化方法，得到32株轉(zhuǎn)基因植株，其中“臺農(nóng)71”有13株，“紫羅蘭”有19株。
　　3、植物表達(dá)載體pCAMBIA1301-SL的構(gòu)建
　　根據(jù)SPFMV（GenBank登錄號為D86371）CP基因cD

4、NA序列設(shè)計(jì)2對引物，通過RT-PCR擴(kuò)增出目的基因并測序。測序結(jié)果表明擴(kuò)增的片段與報(bào)道的序列同源性為96.8%。通過酶切與連接構(gòu)建出中間載體pMD18-SL，同時(shí)雙酶切質(zhì)粒pMD18-SL與pCAMBIA1301并將它們連接，成功構(gòu)建出植物表達(dá)載體pCAMBIA1301-SL。
　　4、植物表達(dá)載體pCAMBIA1301-SL對甘薯的轉(zhuǎn)化
　　以甘薯品種“臺農(nóng)71”、“紫羅蘭”和“廣菜薯1號”的莖段為轉(zhuǎn)化受體，通過農(nóng)桿菌介