AtNHX 1基因植物表達載體的構建及農(nóng)桿菌介導的苜蓿的遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、高鹽是限制作物生長、發(fā)育和產(chǎn)量的最嚴重的非生物脅迫之一。由于土壤鹽漬化的日趨嚴重，提高作物的耐鹽性已成為一個日益緊迫的研究課題。然而，由于耐鹽反應是一個極為復雜的過程，過去通過傳統(tǒng)的育種和遺傳工程取得的成功非常有限。隨著分子生物學及生物技術的迅速發(fā)展，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了一些與耐鹽相關的新基因，并對這些基因的表達方式及其在耐鹽反應中的作用已逐步了解，這為轉(zhuǎn)基因工程提供了新的材料。目前，通過控制耐鹽相關基因在植物體內(nèi)的表達，已獲得了一些提高耐鹽性的

2、轉(zhuǎn)基因植物。國內(nèi)已有應用擬南芥液泡膜Na+/H+逆向轉(zhuǎn)運蛋白基因(AtNHXⅠ)轉(zhuǎn)化玉米和小麥等農(nóng)作物，并獲得了耐鹽能力相對提高的轉(zhuǎn)基因植株的文獻報道，這表明應用AtNHXⅠ基因培育耐鹽作物品系具有廣闊的前景。 紫花苜蓿(MedicagosativaL)作為一種價值最高的優(yōu)質(zhì)豆科牧草，在我國西北和華北地區(qū)的種植面積很廣泛。由于在畜牧業(yè)中占有極其重要的地位，利用基因工程技術來提高苜蓿耐鹽性，期望獲得優(yōu)良抗逆新品系，這對我國牧草業(yè)的

3、發(fā)展有重要的現(xiàn)實意義。 本研究將克隆所得的擬南芥液泡膜Na+/H+逆向轉(zhuǎn)運蛋白基因，添加了植物表達CaM35S啟動子和NospolyA終止子，插入到中間表達載體pCAMBIAl300相應的多克隆位點中，經(jīng)過酶切及PCR鑒定，獲得了重組質(zhì)粒，并通過凍融法將其轉(zhuǎn)化到根癌農(nóng)桿菌LBA4404中，成功地構建了AtNHXⅠ基因的植物表達載體。采用苜蓿品種農(nóng)寶的器官發(fā)生及胚狀體發(fā)生兩種再生體系進行農(nóng)桿菌介導的AtNHXⅠ基因的轉(zhuǎn)化，并對其轉(zhuǎn)