植物凝集素基因植物表達(dá)載體的構(gòu)建及遺傳轉(zhuǎn)化甘蔗.pdf

1、甘蔗(Saccharum offcinarum L.)是我國(guó)最重要的糖料作物,同時(shí)也是一種重要的能源經(jīng)濟(jì)植物。甘蔗粉蚧和綿蚜是甘蔗的重要害蟲,它們不但直接造成甘蔗減產(chǎn)、糖含量降低,而且還是多種甘蔗病毒的傳播媒介,間接傳播病毒引起的病害損失比蟲害直接造成的損失更為嚴(yán)重。利用植物基因工程技術(shù)把抗蟲基因?qū)雰?yōu)良甘蔗品種中使其得到有效的表達(dá)從而表現(xiàn)出抗蟲性是培育甘蔗抗蟲品種最有效的途徑。
　　 雪花蓮凝集素(gna)是目前研究較多的一種

2、單子葉植物甘露糖結(jié)合凝集素,廣泛應(yīng)用于植物害蟲的治理。它能結(jié)合到昆蟲消化道上皮細(xì)胞糖蛋白受體上,對(duì)昆蟲產(chǎn)生局部或系統(tǒng)毒害,抑制害蟲的生長(zhǎng)發(fā)育及繁殖,對(duì)蚜蟲和葉蟬等同翅目害蟲具有高效毒性,同時(shí)對(duì)鱗翅目、鞘翅目的害蟲也有一定的毒性。因此把gna基因轉(zhuǎn)入高產(chǎn)高糖甘蔗品種中使其得到高效的表達(dá),以期提高甘蔗對(duì)綿蚜和粉蚧等同翅目害蟲的抗蟲性。
　　 本研究成功構(gòu)建了中間表達(dá)載體pUN和一個(gè)組成型啟動(dòng)子Ubi驅(qū)動(dòng)gna基因的植物表達(dá)載體pUN

3、G,并用“凍融法”將其導(dǎo)入根癌農(nóng)桿菌EHA105中;通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法對(duì)甘蔗進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化,獲得抗性植株227株,對(duì)其中的183株進(jìn)行PCR檢測(cè),有124株呈陽性。另外轉(zhuǎn)化了Rbcs驅(qū)動(dòng)的gna基因的植物表達(dá)載體prG,獲得54株抗性植株,PCR結(jié)果表明有35株抗性植株呈陽性。初步證明gna基因已整合到甘蔗的基因組中。
　　 隨機(jī)選取6株轉(zhuǎn)Ubi驅(qū)動(dòng)的gna PCR陽性植物進(jìn)行RT-PCR,檢測(cè)植株均呈陽性。對(duì)這些陽性植株進(jìn)行進(jìn)一步