DAZL基因啟動(dòng)子活性初步分析及其誘導(dǎo)劑的篩選、驗(yàn)證.pdf

1、國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No31272429)NationalNaturalScienceFoundationofChina(No31272429)江蘇高校優(yōu)勢(shì)學(xué)科建設(shè)工程資助項(xiàng)目AProjectFundedbythePriorityAcademicProgramDevelopmentofJiangsuHigherEducationInstitutionsIl揚(yáng)州大學(xué)碩士學(xué)位論文熒光素酶報(bào)告基因載體pGL3／893、pGL3／608、

2、pGL3／334、pGL3／147，將其分別轉(zhuǎn)染GCl細(xì)胞和DF1細(xì)胞，利用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)鑒定了蘇禽黃雞DAZL基因核心啟動(dòng)子區(qū)，結(jié)果表明382186bp之間存在著對(duì)DAZL基因有重要作用的調(diào)控元件。2重亞硫酸鹽測(cè)序法測(cè)定了蘇禽黃雞DAZL基因5’側(cè)翼區(qū)一932~39bp片段序列的甲基化程度。在雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)的基礎(chǔ)上，通過(guò)添加DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑(5azacytidine)，檢測(cè)各雙熒光素酶報(bào)告基因載體活性變

3、化，進(jìn)而分析DNA甲基化對(duì)其啟動(dòng)活性和表達(dá)的影響。同時(shí)，添加不同DAZL基因常用誘導(dǎo)劑后檢測(cè)雙熒光素酶報(bào)告基因載體的活性變化以比較這些常用誘導(dǎo)劑對(duì)雞DAZL基因的誘導(dǎo)效率，結(jié)果顯示，誘導(dǎo)劑AmS0、ATRA和誘導(dǎo)劑組合FSHE2對(duì)雞DAZL基因啟動(dòng)子活性誘導(dǎo)效果較佳。3在小鼠DAZL基因啟動(dòng)子上驗(yàn)證了RA、ATRA等常用誘導(dǎo)劑的誘導(dǎo)效果。參照蘇禽黃雞DAZL基因啟動(dòng)子誘導(dǎo)劑篩選實(shí)驗(yàn)的基本思路，進(jìn)一步驗(yàn)證所篩選誘導(dǎo)劑的誘導(dǎo)效率，結(jié)果顯示A