STGC3基因啟動子的初步分析及鑒定.pdf

1、目的：利用生物信息學及報告基因載體分析方法對STGC3基因啟動子區(qū)進行預測及活性檢測，初步鑒定 STGC3基因的啟動子區(qū)域，為闡明 STGC3基因的表達調(diào)控機制提供重要的依據(jù)。
　　方法：根據(jù) STGC3基因的前期研究結(jié)果，利用多種生物信息學軟件對STGC3基因5’端上游調(diào)控區(qū)－3046bp至－46bp區(qū)域的3000bp序列進行啟動子預測，把預測和分析得到的STGC3基因可能的啟動子片段構(gòu)建至螢火蟲熒光素酶報告基因pGL3-enh

2、ance載體上，然后將重組體轉(zhuǎn)染到人胚腎上皮細胞系293T、人鼻咽癌細胞系CNE2及永生化人鼻咽上皮細胞系NP69，并利用雙熒光素酶檢測試劑盒檢測重組質(zhì)粒的活性以初步鑒定STGC3基因的啟動子區(qū)域。
　　結(jié)果：生物信息學分析結(jié)果顯示－3046bp至－46bp區(qū)域的轉(zhuǎn)錄起始位點有兩個，一個在－2348bp處，另一個在－948bp處，而且此區(qū)域存在兩個CpG島，CpG島1位于－1805bp至－1705bp處，長度為101bp; CpG

3、島2位于－900bp至－684bp處，長度為217bp。該區(qū)域未檢測到經(jīng)典的TATA盒序列，－1140bp和－774bp處有GC盒信號，－441bp處有CAAT盒信號。STGC3基因啟動子區(qū)分值0.8以上的區(qū)域位于－2992bp至－69bp，且－845bp至－795bp區(qū)域啟動子分值最高達到1.0。
　　實驗結(jié)果顯示pGL3-en283、pGL3-en281、 pGL3-en571質(zhì)粒在NP69、293T和CNE2三種細胞中相對于

4、陰性對照pGL3-enhance質(zhì)粒均有較強的啟動子活性，其中 pGL3-en281質(zhì)粒在三種細胞中的啟動子活性最強，故－934bp至－653bp區(qū)域有可能是其核心啟動子區(qū)，而且可能在－653bp至＋72bp的DNA序列中含有負性調(diào)控元件，而三種質(zhì)粒在293T細胞中比其在CNE2細胞中的啟動子活性強，可能在CNE2細胞中存在影響啟動子活性的因素。
　　結(jié)論：
　　（1）STGC3基因啟動子區(qū)位于－2992bp至－69bp區(qū)域