內(nèi)含子對煙草鐵蛋白基因功能影響的研究.pdf

1、用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將克隆的煙草鐵蛋白基因組基因InFer1轉(zhuǎn)入煙草，獲得T0代轉(zhuǎn)基因煙草種子。對T1代轉(zhuǎn)煙草鐵蛋白基因組基因InFer1和鐵蛋白cDNA基因NtFer1的卡那霉素抗性分析表明，整合到煙草基因組的外源基因多為單拷貝基因，也有少數(shù)為多拷貝基因。對具有卡那霉素抗性的轉(zhuǎn)基因植株進行PCR-Southern檢測和Northern雜交分析表明，外源基因已整合到煙草基因組，并且表達正確。將轉(zhuǎn)基因株系栽于100μ mol/LFe2+和300

2、μ mol/LFe2+濃度的MS培養(yǎng)基中，生長1個月后進行比較表明，轉(zhuǎn)基因煙草和非轉(zhuǎn)基因煙草的株高、鮮重、葉綠素相對含量、MDA活性、POD活性、SOD活性和葉片鐵含量相比存在明顯差異:在300μ mol/L Fe2+條件下，轉(zhuǎn)NtFer1基因煙草的長勢明顯優(yōu)于轉(zhuǎn)InFer1基因煙草和非轉(zhuǎn)基因煙草;轉(zhuǎn)InFer1基因煙草的MDA含量比轉(zhuǎn)NtFer1基因煙草低，而SOD活性與MDA含量的變化趨勢相反;在100μmol/L Fe2+和300

3、μ mol/L Fe2+濃度的MS培養(yǎng)基中轉(zhuǎn)NtFer1基因煙草葉片鐵含量分別高于轉(zhuǎn)InFer1基因煙草19.7％和21％，高于非轉(zhuǎn)基因煙草22％和8.1％，且差異達到顯著水平。在盆載條件下，45d后轉(zhuǎn)InFer1基因煙草光合作用速率、蒸騰作用速率和葉片氣孔導(dǎo)度平均值分別比轉(zhuǎn)NtFer1基因煙草和非轉(zhuǎn)基因煙草高11％和5.7％、49.7％和163％、68.2％和79.8％;且差異達到顯著水平。
　　在100μ mol/L和300μ

4、 mol/LFe2+條件下煙草鐵蛋白基因內(nèi)的內(nèi)含子具有抑制煙草鐵蛋白基因過量表達的作用;在300μ mol/L Fe2+條件下具有提高葉片SOD活性和降低MDA氧化基團的含量的作用，從而降低氧化基團對葉片膜系統(tǒng)的傷害。在盆載條件下煙草鐵蛋白基因的內(nèi)含子有促進煙草葉片光合作用和蒸騰作用功能，并且能夠增強氣孔導(dǎo)度。
　　運用同樣的方法將鐵蛋白基因組基因InFer1導(dǎo)入楊樹基因組中，對轉(zhuǎn)基因楊樹進行了PCR、PCR-Southern檢測