紫花苜蓿3個(gè)開花相關(guān)基因的克隆與初步鑒定.pdf

1、紫花苜蓿是一種重要的豆科牧草,研究其成花機(jī)理具有重要意義。本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用同源克隆和RACE技術(shù)獲得紫花苜蓿LEAFY(LFY)基因、Flowering Locus T(FT)基因和NMH7基因的cDNA序列,并進(jìn)行初步鑒定。主要研究結(jié)果如下:
　　 紫花苜蓿LFY基因全長2138bp,包含兩個(gè)內(nèi)含子；開放閱讀框長為1176bp,編碼392個(gè)氨基酸；編碼的蛋白定位于細(xì)胞核;半定量RT-PCR結(jié)果表明,該基因在根、莖、葉、花蕾、花和莢果

2、中都有表達(dá),花蕾中的表達(dá)量最高,花和莢果中次之,根、莖和葉中的表達(dá)量較低；該基因的表達(dá)受光照和赤霉素誘導(dǎo),隨著處理時(shí)間的增加,表達(dá)量呈上升趨勢,達(dá)到一定水平后保持不變;通過構(gòu)建該基因的植物表達(dá)載體,運(yùn)用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法將該基因?qū)霟煵葜?PCR和RT-PCR檢測結(jié)果表明,成功獲得轉(zhuǎn)基因煙草,為進(jìn)一步研究該基因的功能奠定了基礎(chǔ)。
　　 紫花苜蓿FT基因全長1705bp,包含三個(gè)內(nèi)含子；開放閱讀框528bp,編碼176個(gè)氨基酸；編碼

3、的蛋白定位于細(xì)胞核中;表達(dá)分析結(jié)果表明,該基因在葉和花蕾中的表達(dá)量最高,花中次之,在根、莖和莢果中的表達(dá)水平都很低;該基因的表達(dá)受光照和水楊酸的誘導(dǎo),隨著處理時(shí)間的增加,表達(dá)量呈現(xiàn)上升趨勢,達(dá)到一定水平后保持不變；運(yùn)用TAIL-PCR技術(shù),獲得該基因轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游1235bp的序列,順勢作用元件分析表明這一序列包含大量光誘導(dǎo)元件,同時(shí)還包含水楊酸應(yīng)答元件、熱應(yīng)答元件和MYB結(jié)合元件。
　　 紫花苜蓿NMH7基因的開放閱讀框長為