RACE法克隆紫花苜蓿光敏色素A基因.pdf

1、許多國家栽培苜蓿時，多把秋眠性作為品種選擇的首要指標(biāo)，因此對秋眠性的研究引起了苜蓿栽培國家科學(xué)家們的廣泛關(guān)注。已經(jīng)證明短日照是引起苜蓿秋眠性的主要環(huán)境因子，說明苜蓿的秋眠存在著光周期效應(yīng)，而與光周期密切相關(guān)的是光受體，光敏色素A、B又是植物中最重要的光受體，因此我們推測光敏色素與苜蓿的秋眠存在著一定的關(guān)系。這對于解決國際上秋眠機理不清的問題有極為重要的意義。 實驗提取紫花苜蓿總RNA，通過RT-PCR獲得phyA基因片段，送測序

2、公司進行產(chǎn)物PCR測序，測序結(jié)果經(jīng)BLAST比較，與其他豆科植物phyA基因同源性達90％以上，證明該cDNA序列為紫花苜蓿的phyA基因片段。然后再選取效果比較好的WL-525樣本RNA進行后續(xù)3′RACE和5′RACE實驗。實驗通過改進和優(yōu)化PCR條件，很有效地擴增出目的片段，并將目的片段克隆到pMD19-T載體上，得到重組質(zhì)粒，測序的結(jié)果分別用BLAST進行比較。比較結(jié)果顯示與其他豆科植物phyA基因的同源性較高，可以證明所得基因