魚源芽孢桿菌在石斑魚育苗中的應(yīng)用及作用機理的初步研究.pdf

1、本研究以2株分離于斜帶石斑魚腸道的芽孢桿菌單獨或聯(lián)合強化輪蟲或橈足類，再投喂石斑魚魚苗，研究益生菌對石斑魚仔稚魚生長、存活、非特異性免疫、養(yǎng)殖水體水質(zhì)以及腸道菌群的影響，為海水魚益生菌的開發(fā)應(yīng)用提供依據(jù)。試驗分如下4個部分。
　　 1、魚源芽孢桿菌對石斑魚仔魚生長和非特異性免疫功能的影響
　　 投喂經(jīng)益生菌強化的輪蟲9d后，DE5(克勞氏芽孢桿菌，Bacillus clausii)組和混合組存活率高于對照組。益生菌組仔魚

2、體長均高于對照組。SE5(短小芽孢桿菌，B.pumilus)組仔魚體內(nèi)溶菌酶活力顯著高于對照組。DE5組和混合組總超氧化物歧化酶(T-SOD)活力均顯著高于對照組。SE5組仔魚體內(nèi)堿性磷酸酶(AKP)活力顯著高于對照組。SE5組和DE5組仔魚體內(nèi)丙二醛(MDA)含量低于對照組，混合組顯著高于對照組。以上結(jié)果提示：芽孢桿菌SE5和DE5能夠促進仔魚生長、增加存活率和提高免疫功能。
　　 2、魚源芽孢桿菌對石斑魚仔魚腸道菌群結(jié)構(gòu)的影

3、響
　　 益生菌處理9d后，益生菌組仔魚體內(nèi)細菌總數(shù)和弧菌數(shù)量均顯著低于對照組。益生菌組水體弧菌數(shù)量均低于對照組。SE5組和混合組活餌弧菌數(shù)量低于對照組。芽孢桿菌單獨或聯(lián)用作用9d后，仔魚相關(guān)樣品經(jīng)過PCR-DGGE分析，益生菌組與對照組仔魚腸道均有一些共有條帶和差異條帶，且與水體、活餌樣品菌群均有一定的相似性。SE5組仔魚腸道主要優(yōu)勢條帶Z5、Z7，最相似菌分別為Uncultured bacterium clone T1-3_

4、47016Sribosomal RNA gene和Uncultured bacterium clone F1Q32TO03C9LWK16S ribosomal RNAgene，相似性分別為93%和96%。DE5組仔魚腸道優(yōu)勢優(yōu)勢差異條帶為Z3，Z3最相似菌為Uncultured bacterium isolate DGGE gel band216S ribosomal RNA gene，相似性為98%?；旌辖M仔魚腸道差異條帶L14僅存在

5、于對照組輪蟲，最相似菌為Uncultured bacteriumisolate DGGE gel band19-716S ribosomal RNA gene，相似性為100%。
　　 綜上所述，芽孢桿菌SE5和DE5均具有一定調(diào)節(jié)石斑魚仔魚腸道菌群的能力，仔魚腸道菌群結(jié)構(gòu)與輪蟲菌群和水體菌群有關(guān)，SE5、DE5單獨或聯(lián)用均能控制腸道有害菌數(shù)量、調(diào)節(jié)腸道菌群平衡。
　　 3、魚源芽孢桿菌對石斑魚稚魚生長和非特異性免疫的影

6、響
　　 投喂經(jīng)芽孢桿菌SE5和DE5單獨或聯(lián)合強化的橈足類，飼養(yǎng)14 d時，益生菌組石斑魚稚魚體長、體質(zhì)量均高于對照組。飼養(yǎng)28 d時，益生菌組體長和體質(zhì)量均高于對照組，SE5組和DE5組存活率顯著高于對照組。芽孢桿菌處理14 d和28 d后，與對照組相比，DE5組和混合組石斑魚稚魚體內(nèi)溶菌酶活力均有所提高。芽孢桿菌處理14 d和28 d后，益生菌組石斑魚稚魚體內(nèi)SOD活力均高于對照組。提示益生菌提高了稚魚的免疫功能，這也可能

7、是導致稚魚存活率的提高的重要原因。
　　 4、魚源芽孢桿菌對石斑魚稚魚腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響
　　 投喂經(jīng)芽孢桿菌SE5和DE5單獨或聯(lián)合強化的橈足類，飼養(yǎng)28 d時，各試驗組稚魚體內(nèi)細菌總數(shù)高于對照組，其中DE5組顯著高于對照組；DE5組和SE5組稚魚體內(nèi)弧菌數(shù)量高于對照組。芽孢桿菌作用稚魚28 d后，仔魚樣品經(jīng)過PCR-DGGE分析，益生菌組與對照組稚魚腸道均有一些共有條帶和差異條帶，且與水體樣品菌群有一定的相似性。SE

8、5組腸道主要優(yōu)勢差異條帶H5、H12為益生菌組稚魚腸道特有條帶，最相似菌分別為Vibriosp.SBb1S1316S ribosomal RNA gene和Uncultured bacterium clone F77608Q01AUACS16Sribosomal RNA gene，相似性分別為93%和92%。條帶H20為DE5組稚魚腸道特有條帶，最相似菌為Uncultured bacterium clone ncd1505e06c116

9、S ribosomal RNA gene，相似性為86%。差異優(yōu)勢條帶H5、H23和H24為混合組組稚魚特有條帶，H23和H24最相似細菌分別為Vibrio scophthalmi strain D72516S ribosomal RNA gene和Vibrio sp.5Bb1S1316Sribosomal RNA gene，相似性分別為98%和94%。綜上所述，芽孢桿菌SE5和DE5均具有一定調(diào)節(jié)石斑魚稚魚腸道菌群的能力，促進腸道菌群