FMDV抗原表位多肽及分子佐劑對(duì)小鼠上呼吸道免疫的影響.pdf

1、上呼吸道接種免疫作為新型的FMDV接種途徑，正在被越來(lái)越多的預(yù)防醫(yī)學(xué)研究工作者所重視。很大一部分流行病都是由呼吸道感染機(jī)體，因此是否能夠建立起上呼吸道黏膜免疫保護(hù)是機(jī)體能否抵御病毒入侵的關(guān)鍵，上呼吸道粘膜免疫保護(hù)機(jī)制也為預(yù)防醫(yī)學(xué)提供了研究防控疾病的有效途徑。粘膜佐劑作為黏膜免疫研究的一個(gè)重要組成部分能夠顯著增強(qiáng)粘膜免疫保護(hù)效果。很多免疫增強(qiáng)劑都被應(yīng)用到黏膜免疫的研究中來(lái)，但絕大多數(shù)佐劑都是經(jīng)驗(yàn)總結(jié)的產(chǎn)物，作用機(jī)理難以透徹研究。FMDV經(jīng)

2、濟(jì)上具有重大的影響，其每次大規(guī)模爆發(fā)流行都會(huì)給人類(lèi)帶來(lái)了數(shù)以?xún)|計(jì)的經(jīng)濟(jì)損失，研究防控各亞型大流行的新型高通量疫苗迫在眉睫。因此研究上呼吸道黏膜免疫對(duì)防控該病流行是行之有效的手段之一。
　　 本研究結(jié)合了上呼吸道黏膜免疫、FMDV抗原表位多肽、CTB佐劑、核酸佐劑和細(xì)胞因子佐劑等研究?jī)?nèi)容在小鼠上進(jìn)行了對(duì)比試驗(yàn)。利用分子生物學(xué)技術(shù)、基因工程技術(shù)、生物信息學(xué)技術(shù)和DNA逆向工程技術(shù)構(gòu)建Asia1 FMDV抗原表位多肽基因經(jīng)Linker

3、蛋白基因與CTB多肽基因串聯(lián)構(gòu)建了抗原表位多肽基因31c。反轉(zhuǎn)錄法克隆了成年牛干擾素cDNA即BoIFN-γ基因，將表達(dá)純化得到的BoIFN-γ成熟多肽蛋白作為了輔助31C多肽的佐劑。在建立的多肽與全病毒對(duì)照組、細(xì)胞因子核酸佐劑與活性多肽佐劑對(duì)照組、上呼吸道免疫與皮下接種免疫對(duì)照組和CTB佐劑研究組等一系列研究中，通過(guò)間接ELISA檢測(cè)分泌型IgA抗體水平，應(yīng)用微量血清中和試驗(yàn)檢測(cè)體液免疫水平，淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞免疫水平以及應(yīng)用反

4、轉(zhuǎn)錄熒光定量PCR檢測(cè)IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ在頸部淋巴、肺臟及脾臟內(nèi)的變化。通過(guò)以上數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析得出黏膜免疫保護(hù)水平、全身體液免疫水平、全身細(xì)胞免疫水平和黏膜免疫誘導(dǎo)應(yīng)答調(diào)節(jié)各個(gè)器官的細(xì)胞因子調(diào)節(jié)變化規(guī)律。
　　 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明人工合成的抗原表位級(jí)聯(lián)多肽31C的免疫活性顯著高于商品化多肽，證明了抗原表位多肽31C可以誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生中和性抗體和分泌型抗體。證明了鼻腔免疫多肽抗原不僅可以誘導(dǎo)口腔及鼻腔內(nèi)產(chǎn)生分泌型抗體

5、，其還可以誘導(dǎo)遠(yuǎn)端生殖道內(nèi)產(chǎn)生分泌型抗體。鼻腔免疫具有較皮下免疫更早誘導(dǎo)免疫記憶性細(xì)胞的能力。驗(yàn)證了CTB佐劑可以輔助融合表達(dá)多肽顯著提高后者的免疫原性。且證明了CTB具有提高口鼻分泌液中sIgA抗體水平的功效，通過(guò)鼻腔免疫小鼠，CTB可以顯著增加結(jié)合在其表面抗原表位的體液免疫抗體水平。研究了mBoIFN-γ多肽pBoIFN-γ，基因在粘膜佐劑中的作用，mBoIFN-γ作為效應(yīng)細(xì)胞因子可以顯著增強(qiáng)注入部位的IFN-γ表達(dá)水平和sIgA表