黃芪多糖與白花蛇舌草多糖增強豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗免疫效力及其機理研究.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Porcine reproductive andrespiratory syndrome virus，PRRSV）引起的一種嚴重危害養(yǎng)豬業(yè)的病毒性傳染病，主要導(dǎo)致妊娠母豬流產(chǎn)、死胎、木乃伊胎、弱仔等繁殖障礙和仔豬的大量死亡。該病至今尚無有效的治療方法，疫苗預(yù)防是主要的措施。疫苗的研究已取得顯著進展，世界上商品化的PRRS疫苗有滅活疫苗和弱毒活疫苗兩類。臨床上PRRS疫苗主要存在的問題是：第一

2、，疫苗產(chǎn)生免疫反應(yīng)需要較長時間；其次，PRRSV疫苗并不具備完全的保護力，尤其是滅活疫苗不能激發(fā)細胞免疫；第三，PRRSV弱毒疫苗可以在免疫豬體組織中存在幾周時間，并且從注苗豬向易感豬傳播。因此，應(yīng)用滅活疫苗增強疫苗免疫效力和安全性，研制免疫增強劑來提高PRRS滅活疫苗的免疫效果具有顯著優(yōu)勢。大量研究表明，黃芪多糖和白花蛇舌草多糖具有顯著的免疫增強作用，作為免疫增強劑有顯著優(yōu)勢。本試驗選取黃芪多糖和白花蛇舌草多糖聯(lián)合PRRS滅活疫苗免疫

3、仔豬，觀察其聯(lián)合應(yīng)用對疫苗免疫效果的影響，研究其免疫增強作用和機理，旨在篩選具有較好免疫增強作用的單味或復(fù)合中藥成分，為研制免疫增強劑提供理論依據(jù)。試驗分為以下六部分：
　　 試驗Ⅰ、黃芪多糖和白花蛇舌草多糖提取及含量測定
　　 提取黃芪多糖（APS）和白花蛇舌草多糖（OPS），為下一步研究多糖的活性及篩選具有較好免疫增強作用的單味或復(fù)合中藥成分，本試驗進行APS和OPS的提取及其含量的測定。采用水提醇沉法提取多糖，苯酚

4、-硫酸法測定多糖含量。結(jié)果表明，黃芪多糖和白花蛇舌草多糖的提取率分別為21.69％、13.58％，凈含量分別為44.61％、27.25％。
　　 試驗Ⅱ、黃芪多糖和白花蛇舌草多糖的體外篩選試驗
　　 本試驗通過黃芪多糖和白花蛇舌草多糖對小鼠脾臟淋巴細胞增殖的影響，篩選具有較好免疫增強作用的單味或復(fù)合中藥成分。采用MTT法比較黃芪多糖、白花蛇舌草多糖以及黃芪多糖聯(lián)合白花蛇舌草多糖直接作用以及協(xié)同ConA或LPS促進體外培養(yǎng)

5、小鼠脾臟淋巴細胞的增殖作用。結(jié)果表明，APS和OPS均能促進淋巴細胞增殖，而且APS和OPS在一定濃度既能單獨又能協(xié)同ConA或LPS刺激淋巴細胞增殖，OPS作用較強，并且APS和OPS聯(lián)合作用與OPS單獨作用效果差異不顯著。
　　 試驗Ⅲ、黃芪多糖和白花蛇舌草多糖對PRRS滅活疫苗對免疫效果的影響
　　 本試驗通過觀察PRRS抗體水平的動態(tài)變化，研究黃芪多糖和白花蛇舌草多糖與PRRS滅活疫苗聯(lián)合應(yīng)用對仔豬免疫效果的影響

6、。20頭（26±1）日齡PRRS檢測陰性豬隨機分成5組，所有豬均注射豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗，同時試驗組分別肌肉注射高、中、低劑量白花蛇舌草多糖和黃芪多糖，空白對照組注射等劑量生理鹽水，每天1次，連續(xù)3 d。分別在注射疫苗后7、14、24、34、44、54、69 d前腔靜脈采血。ELISA方法測定抗體。結(jié)果表明，APS和OPS均能提高PRRSV滅活疫苗免疫后小豬血清中抗體水平，促進抗體提前達到峰值，OPS各組抗體水平維持時間要優(yōu)于對照

7、組和APS試驗組，OPS中劑量組免疫增強作用優(yōu)于低劑量組和高劑量組。
　　 試驗Ⅳ、黃芪多糖和白花蛇舌草多糖對豬外周血淋巴細胞增殖影響
　　 本試驗通過觀察豬外周血淋巴細胞增殖的影響，探討黃芪多糖和白花蛇舌草多糖聯(lián)合豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗增強免疫作用機理。試驗動物處理同試驗Ⅲ.MTT法測定外周血淋巴細胞增殖。結(jié)果表明，無論ConA、LPS刺激APS和OPS，還是APS和OPS直接作用均能顯著促外周血淋巴細胞增殖：OP

8、S中劑量組>OPS高劑量組>APS組>生理鹽水組。
　　 試驗V、黃芪多糖和白花蛇舌草多糖對PRRS滅活疫苗免疫后T細胞亞群的影響
　　 本試驗通過觀察仔豬免疫后T細胞亞群動態(tài)變化，探討黃芪多糖和白花蛇舌草多糖聯(lián)合豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗增強免疫作用機理。試驗動物處理同試驗Ⅲ。通過流式細胞儀檢測豬外周血CD3+、CD4+、CD8+細胞百分數(shù)。結(jié)果表明，APS和OPS均能顯著提高仔豬的CD3+、CD4+、CD8+淋巴細胞

9、的百分數(shù)；OPS中劑量組CD4+/CD8+比值極顯著高于生理鹽水和APS組（P<0.01），表明黃芪多糖和白花蛇舌草多糖均能提高機體細胞免疫力，但提高機體免疫力則與劑量有關(guān)。
　　 試驗Ⅵ、黃芪多糖和白花蛇舌草多糖對PRRS滅活疫苗免疫后IL-2和IFN-γ的影響
　　 本試驗通過觀察仔豬免疫后IL-2和IFN-γ動態(tài)變化水平，探討黃芪多糖和白花蛇舌草多糖聯(lián)合豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗增強免疫作用機理。試驗動物處理同試驗