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1、大豆(Glycine max(L.) Merr.)是一種重要的油料和飼料作物,也是人類的主要食用蛋白和工業(yè)原料的來(lái)源。遺傳轉(zhuǎn)化不僅可以是研究基因功能,也是將優(yōu)良外源基因?qū)氪蠖怪信嘤蠖剐缕贩N的主要方法。與其他作物相比,大豆是較難轉(zhuǎn)化的作物,主要體現(xiàn)在轉(zhuǎn)化效率低、轉(zhuǎn)化后植株再生頻率低及重復(fù)性差等方面,因此建立理想、高效的大豆轉(zhuǎn)化體系,是目前研究熱點(diǎn)之一。
目前有多種植物遺傳轉(zhuǎn)化的方法,其中根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的子葉節(jié)法是國(guó)內(nèi)外植
2、物基因工程中較為常用的方法之一,本研究以大豆品種“中黃10”、“中豆32”、“Peking”的成熟種子為材料,用攜帶有抗旱、耐鹽目的基因GmPK(pBI121/pEGAD)的農(nóng)桿菌EHA105侵染外植體,對(duì)農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化大豆的影響因素進(jìn)行研究,同時(shí)從培養(yǎng)基改進(jìn)等方面對(duì)遺傳轉(zhuǎn)化體系進(jìn)行優(yōu)化,以提高農(nóng)桿菌的侵染率、叢生芽的誘導(dǎo)率等,建立一種穩(wěn)定性好、通用性強(qiáng)的大豆轉(zhuǎn)化技術(shù)體系,達(dá)到將目的基因?qū)氪蠖?,獲得轉(zhuǎn)基因植株,提高轉(zhuǎn)化效率的目的。
3、r> 獲得的主要結(jié)果如下:
1.大豆子葉節(jié)高再生力基因型的篩選。用含不同質(zhì)粒(pBI121/pEGAD)的同一農(nóng)桿菌菌株EHA105浸染13個(gè)不同基因型大豆的子葉節(jié),不同基因型之間再生頻率有明顯差異,它們的再生頻率變幅分別為0-51%和0-51.9%,從中篩選出中黃10、中豆32、Peking三個(gè)再生頻率較高的基因型。
2.葡萄糖濃度對(duì)農(nóng)桿菌侵染效率的影響。通過(guò)葡萄糖濃度(5 g/L、10 g/L、15
4、 g/L)的梯度實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)向共培養(yǎng)培養(yǎng)基中加入10 g/L的葡萄糖可以有效促進(jìn)農(nóng)桿菌對(duì)外植體的侵染,用GUS化學(xué)組織染色檢測(cè),結(jié)果表明農(nóng)桿菌侵染效率平均達(dá)76.7%。
3.不同濃度維生素C對(duì)不同基因型抑制褐變的效果。在誘導(dǎo)叢生芽階段,通過(guò)濃度梯度實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在培養(yǎng)基中針對(duì)不同基因型加入適宜濃度的Vc(中黃10:25 mg/L,Peking:50 mg/L,中豆32:100 mg/L),可有效防止外植體褐化,阻止細(xì)胞死亡。
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