野生大豆?jié)B透脅迫相關(guān)蛋白激酶基因的克隆及功能分析.pdf

1、 II 3.1.1 野生大豆 ESTs 數(shù)據(jù)的收集 ........................................................................................42 3.1.2 滲透脅迫早期應(yīng)答蛋白激酶 ESTs 的篩選 ................................................................42 3.2 滲透脅迫

2、相關(guān)激酶基因的克隆及序列分析........................................................................44 3.2.1 全長基因的克隆 ..........................................................................................................44 3.2.2 基因

3、產(chǎn)物的生物信息學(xué)分析.......................................................................................54 3.3 激酶基因在不同脅迫處理下的表達(dá)特性分析....................................................................63 3.3.1 不同脅迫處理下野生大豆總 RNA 的獲得

4、 ................................................................63 3.3.2 不同脅迫處理下激酶基因的表達(dá)特性分析...............................................................65 3.4 激酶基因的瞬時(shí)表達(dá)及亞細(xì)胞定位分析.........................................

5、...................................67 3.4.1 植物瞬時(shí)表達(dá)載體的構(gòu)建...........................................................................................67 3.4.2 激酶基因的亞細(xì)胞定位分析.....................................................

6、..................................68 3.5 激酶蛋白的原核表達(dá)分析 ...................................................................................................70 3.5.1 原核表達(dá)載體的構(gòu)建..................................................

7、.................................................70 3.5.2 激酶蛋白的誘導(dǎo)及純化...............................................................................................72 3.6 激酶蛋白 GsCBRLK 的體外結(jié)合特異性分析...........................

8、.........................................73 3.6.1 GsCBRLK 中 CaMBD 的預(yù)測 ....................................................................................73 3.6.2 GsCBRLK 缺失突變及 GsCaM 原核表達(dá)載體的構(gòu)建............................

9、..................73 3.6.3 GsCBRLK 全長及缺失突變蛋白的誘導(dǎo)及驗(yàn)證........................................................75 3.6.4 GsCBRLK 與 GsCaM 蛋白的體外結(jié)合特異性分析..................................................76 3.6.5 GsCBRLK 與 GsCaM 蛋白

10、的體外結(jié)合模式分析......................................................76 3.7 激酶蛋白 GsCBRLK 的體內(nèi)結(jié)合特異性分析....................................................................77 3.7.1 GsCBRLK 全長、缺失突變及 GsCaM 酵母雙雜交載體的構(gòu)建.................

11、.............77 3.7.2 GsCBRLK 與 GsCaM 蛋白的體內(nèi)結(jié)合特異性分析..................................................78 3.8 激酶蛋白的酶學(xué)特性分析 ...................................................................................................79

12、 3.8.1 不同二價(jià)陽離子對激酶 GsCBRLK 磷酸化活性的影響...........................................79 3.8.2 Ca2+/CaM 對激酶 GsCBRLK 磷酸化活性的影響......................................................79 3.8.3 ABA 對激酶 GsAPK 磷酸化活性的影響....................

13、...............................................80 3.8.4 不同脅迫對激酶 GsLRPK 磷酸化活性的影響 ..........................................................82 3.9 激酶基因 GsLRPK 在酵母中的超量表達(dá)和抗逆性分析................................................

14、...83 3.10 激酶基因 GsCBRLK、GsAPK 在擬南芥中的超量表達(dá)及抗逆功能分析........................84 3.10.1 激酶基因植物表達(dá)載體的構(gòu)建...................................................................................84 3.10.2 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化......................

15、.........................................................................86 3.10.3 抗性植株的分子生物學(xué)檢測.......................................................................................87 3.10.4 激酶基因 GsCBRLK、GsAPK 超量表達(dá)植株的抗逆

16、功能分析................................89 4 討 論..........................................................................................................................................96 4.1 抗逆基因供體材料的選擇 ..................

17、.................................................................................96 4.2 目的基因的選擇 ...................................................................................................................96 4.3 基于