小麥八氫番茄紅素合成酶基因(PSY1)的克隆與原核表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、類胡蘿卜素是自然界存在的一類由異戊二烯為結構單位組成的化合物的總稱，其按照是否含氧可分為胡蘿卜素和葉黃素兩大類。類胡蘿卜素廣泛存在于部分細菌、真菌和植物中。很多類蘿卜素有著獨特的生理功能，對人體健康起到了非常重要的作用。在小麥中構建類胡蘿卜素生物合成途徑，使類胡蘿卜素積累，從而提高小麥的營養(yǎng)價值。
　　 本實驗根據發(fā)表的小麥八氫番茄紅素合成酶基因(PSY1)序列設計特異性引物，以小麥葉片總RNA為模板，用RT-PCR方法擴增出1

2、400 bp大小的片段，并將其連接到pMD18-T載體上轉化進大腸桿菌感受態(tài)細胞。測序結果顯示，克隆的基因序列全長1436 bp，包含一個1287 bp的完整的開放閱讀框，編碼的蛋白質由428個氨基酸構成。經過生物信息學分析，發(fā)現此基因與其它物種的PSY基因中的PSY1同源性更高，確認是小麥中的PSY1基因。
　　 將得到的小麥PSY1基因片段連接到原核表達載體pET-32a上，構建重組表達載體，轉化大腸桿菌感受態(tài)細胞，用IPT

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