小麥八氫番茄紅素合成酶基因(PSY1)的克隆與原核表達(dá).pdf

1、類胡蘿卜素是自然界存在的一類由異戊二烯為結(jié)構(gòu)單位組成的化合物的總稱，其按照是否含氧可分為胡蘿卜素和葉黃素兩大類。類胡蘿卜素廣泛存在于部分細(xì)菌、真菌和植物中。很多類蘿卜素有著獨(dú)特的生理功能，對人體健康起到了非常重要的作用。在小麥中構(gòu)建類胡蘿卜素生物合成途徑，使類胡蘿卜素積累，從而提高小麥的營養(yǎng)價(jià)值。
　　 本實(shí)驗(yàn)根據(jù)發(fā)表的小麥八氫番茄紅素合成酶基因(PSY1)序列設(shè)計(jì)特異性引物，以小麥葉片總RNA為模板，用RT-PCR方法擴(kuò)增出1

2、400 bp大小的片段，并將其連接到pMD18-T載體上轉(zhuǎn)化進(jìn)大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞。測序結(jié)果顯示，克隆的基因序列全長1436 bp，包含一個(gè)1287 bp的完整的開放閱讀框，編碼的蛋白質(zhì)由428個(gè)氨基酸構(gòu)成。經(jīng)過生物信息學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)此基因與其它物種的PSY基因中的PSY1同源性更高，確認(rèn)是小麥中的PSY1基因。
　　 將得到的小麥PSY1基因片段連接到原核表達(dá)載體pET-32a上，構(gòu)建重組表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞，用IPT