葡萄鯊烯合酶基因的克隆與原核表達.pdf

1、鯊烯合酶(squalene synthase，SQS or ss)催化兩分子的法尼基焦磷酸(FPP)縮合產(chǎn)生鯊烯，而鯊烯的合成是類異戊二烯中央代謝途徑進入三萜、甾醇等代謝支路的分支點。由于植物甾醇和三萜具有重要的保健和生理功能，因而，鯊烯合酶的研究倍受重視。 本研究采用cDNA末端快速擴增技術(shù)，首次從葡萄的葉片中分離克隆出鯊烯合酶基因，對該基因進行了序列分析。并構(gòu)建了該基因的原核表達載體，成功的在BL21中表達出預期蛋白。具體

2、結(jié)果如下： 1、基因克隆：用Trizol試劑從葡萄葉片中提取總RNA，根據(jù)不同植物SQS基因同源性較高的區(qū)域設計特異引物，利用RT-PCR技術(shù)獲得957bp的葡萄SQS基因的保守序列；再以此序列為依據(jù)設計特異引物，利用RACE技術(shù)獲得葡萄SQS基因的全長eDNA(1595bp)，并命名為VvSQS。VvSQS包含一個完整的開放閱讀框(1242bp)，編碼413個氨基酸殘基，推導出的肽鏈分子量約為47.3kDa。 2、

3、序列分析：葡萄SQS基因全長cDNA與三七(Panax notoginseng)、人參(Panaxginseng)、甘草(Glycyrrhiza uralensis)SQS基因分別有82％、82％、82％的同源性；在氨基酸水平上，葡萄SQS與三七(Panax notoginseng)、人參(Panaxginseng)、甘草(Glycyrrhizauralensis)的SQS分別有84％、83％、84％的一致性和91％、92％、91％的相