金黃色葡萄球菌CHIPS基因克隆及原核表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、金黃色葡萄球菌趨化抑制蛋白(ChemotaxisInhibitoryProteinofStaphylococcusaureus，CHIPS)是由金黃色葡萄球菌分泌到菌體外的一種蛋白，能特異性地與中性粒細胞和單核細胞上的C5a受體(C5aR)和fMLP受體(FPR)結合，從而阻止細胞的趨化作用。但是，可否將CHIPS作為藥物來治療由C5a或fMLP誘發(fā)的炎癥性疾病或將CHIPS作為免疫原來防制金黃色葡萄球菌感染，目前尚不清楚。 本

2、試驗設計合成了一對PCR擴增特異性引物，分別從金黃色葡萄球Newman株和CowanI株中擴增獲得了CHIPS基因，進一步將其克隆到pMD18-T載體獲得重組質粒pMD-N和pMD-C，并對其進行測序分析。結果，與GenBank中提供的CHIPS基因序列相比，Newman株具有100％的同源性，CowanI株只有一個堿基突變R298A→G；二者氨基酸同源性均為100％。說明CHIPS基因高度保守。 將pMD-N/pMD-C質粒和

3、pET32a(+)表達載體進行BamHI和SalI雙酶切，回收CHIPS基因片段，將其插入到pET32a(+)原核表達載體并轉化到BL-21(DE3)E.coli，經(jīng)篩選分別獲得pET-N/DE3和pET-C/DE3重組體細菌。經(jīng)IPTG誘導表達和SDS-PAGE分析，結果與對照菌株相比，誘導后的pET-N/DE3和pET-C/DE3表達約為31.8kDa的融合蛋白，且表達蛋白存在于菌體超聲波裂解上清中；進一步對其進行western-b

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