應(yīng)用基因芯片檢測(cè)食品中金黃色葡萄球菌.pdf

1、傳統(tǒng)方法對(duì)食品中的金黃色葡萄球菌的檢測(cè)所需要的時(shí)間太長(zhǎng)，不能在短時(shí)間內(nèi)檢測(cè)出金黃色葡萄球菌。利用生物芯片進(jìn)行金黃色葡萄球菌的的高通量檢測(cè)和鑒定已經(jīng)成為許多人的共識(shí)，但至今還未真正實(shí)現(xiàn)。為了在短時(shí)間內(nèi)檢測(cè)出食品中的金黃色葡萄球菌，本研究在利用生物芯片的高通量基礎(chǔ)上，建立一種基于基因芯片快速檢測(cè)和鑒定食品中金黃色葡萄球菌的技術(shù)。 從金黃色葡萄球菌中提取染色體DNA，通過(guò)細(xì)菌通用引物擴(kuò)增金黃色葡萄球菌的16SrRNA，以16SrRNA

2、為靶標(biāo)，針對(duì)待檢的金黃色葡萄球菌設(shè)計(jì)基因探針，制備基因芯片。為了減少基因芯片假陰性和假陽(yáng)性的比率，還特別設(shè)置了細(xì)菌的通用探針和葡萄球菌屬的特異性探針。待檢測(cè)的金黃色葡萄球菌擴(kuò)增和標(biāo)記后，與芯片雜交，對(duì)雜交圖譜分析歸納，得到一套特異的檢測(cè)方式。然后用基因芯片檢測(cè)從食品中分離的金黃色葡萄球菌。最后進(jìn)行金黃色葡萄球菌樣品檢測(cè)的靈敏度實(shí)驗(yàn)。 用設(shè)計(jì)的基因芯片檢測(cè)金黃色葡萄球菌，結(jié)果良好。同時(shí)也用志賀菌、豬鏈球菌來(lái)驗(yàn)證設(shè)計(jì)的基因芯片，檢測(cè)

3、到的結(jié)果與理論結(jié)果相符。然后用經(jīng)過(guò)檢測(cè)的基因芯片檢測(cè)從食品中分離的金黃色葡萄球菌，檢測(cè)到的結(jié)果與理論結(jié)果相符。 以含有金黃色葡萄球菌的特異性探針的基因芯片為模型，，初步探討了利用基因芯片檢測(cè)金黃色葡萄球菌的可行性。在已有的基礎(chǔ)上優(yōu)化了雜交和洗滌的條件，縮短了雜交時(shí)間。在此基礎(chǔ)上確定了以相對(duì)信號(hào)強(qiáng)弱為依據(jù)的信號(hào)陰陽(yáng)性判斷思路，以及以特異性雜交圖譜為基礎(chǔ)的金黃色葡萄球菌的檢測(cè)方式。結(jié)果表明利用基因芯片實(shí)現(xiàn)金黃色葡萄球菌的高通量鑒定是

4、完全可行的，提出的雜交信號(hào)判斷方法保證了鑒定結(jié)果的穩(wěn)定性。 該芯片對(duì)金黃色葡萄球菌的檢測(cè)靈敏度不高，在30ul的體系中達(dá)6.8×105cfu才能被檢測(cè)到。此靈敏度較低并不意味著該芯片的該芯片檢測(cè)系統(tǒng)的靈敏度就很差，因?yàn)槠鋵?shí)際上取決于樣品的提取和擴(kuò)增效率。 本研究建立的基因芯片檢測(cè)金黃色葡萄球菌具有較強(qiáng)的特異性和穩(wěn)定性，能在較短的時(shí)間內(nèi)檢測(cè)出待檢的金黃色葡萄球菌，可靠性較好。由于針對(duì)金黃色葡萄球菌檢測(cè)的特意性和穩(wěn)定性較好。