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文檔簡介
1、白藜蘆醇(三羥基反式芪)存在于少數(shù)幾種植物中,是一種植物抗毒素,同時藥理學的研究表明,它具有抗癌抗心血管疾病等生理活性.白藜蘆醇合酶是催化合成白藜蘆醇的關鍵酶,對該酶及其基因的研究既有助于更深入地了解該酶的催化合成機理,又有助于進行轉基因提高其它作物的抗病性.該實驗的目的是從花生中克隆白藜蘆醇合酶基因,并在大腸桿菌中表達該基因,為以后開展轉基因工作以及探索酶的功能的工作奠定基礎.該實驗使用反轉錄PCR(RT-PCR)的方法,從花生中提取
2、mRNA,反轉錄為cDNA,利用白藜蘆醇合酶基因特異性的引物從中擴增出目的基因.將目的基因克隆到T-載體pMD-18T上,送檢測序.結果表明,目的基因的長度為1170bp,編碼390個氨基酸,與Genbank中已有的幾個花生白藜蘆醇合酶基因的氨基酸序列的相似性為93%-96%.將目的基因亞克隆到表達載體pQE30-a上,轉化到大腸桿菌M15中,經(jīng)測序表明,目的基因序列及讀碼框均正確,表達載體構建成功.用IPTG誘導重組菌,目的蛋白表達量
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