葡萄白藜蘆醇合酶的生化信息研究.pdf

1、西北大學碩士學位論文葡萄白藜蘆醇合酶的生化信息研究姓名：黨尉申請學位級別：碩士專業(yè)：植物學指導教師：尉亞輝20030501西北大學碩士學位論文葡萄白藜蘆醇合酶的生化信息研究摘要本文以新鮮葡萄(聆出vfH瓣旭工f胍)的果皮為材料，對白藜蘆醇合酶(RS)分離純化方案及其主要生化信息進行了研究與探討。實驗顯示：(1)應用正交實驗方法篩選出RS的抽提方案：提取固液比(g／m1)為1：2，4℃下用01M磷酸鹽緩沖液(PH=75，含5mM巰基乙醇)

2、抽提12小時后，200009，4℃離心15分鐘得到粗酶液。(2)以蛋白質(zhì)分離純化的基本策略為基礎(chǔ)設(shè)計RS的純化程序是：先后用65％、90％飽和度進行硫酸銨分級沉淀；透析脫鹽后依次進行DEAEcellulose52離子交換層析和羥基磷灰石吸附層析，平衡液均為緩沖液D(00lM磷酸鹽緩沖液，PH=75，含1mM巰基乙醇)，用OOl一01M磷酸鹽緩沖液(PH=75，分別含1mM、5mM巰基乙醇)進行梯度洗脫，兩次層析的洗脫液流速分別為O6m婦

3、lin、12m婦血。經(jīng)過該程序后Rs的電泳、層析圖譜分別顯示一條帶、一個峰；Rs的比活力由O35u／mg上升至364U，『mg，純化倍數(shù)由最初設(shè)定的1O增至104。(3)凝膠過濾法測得Rs的相對分子質(zhì)量為87000D；Rs在中性稍偏堿性環(huán)境下活力較高，其最適PH值為75；兩種底物香豆酰輔酶A、丙二酰輔酶A的Km、V。。值分別為193uM，484uM懈n和98uM，495pM／min，由此可知香豆酰輔酶A為RS的最適底物；兩種底物的v【S

4、】曲線均接近于米氏酶的曲線，可初步判斷Rs為米氏酶。(4)利用生物學分析軟件、數(shù)據(jù)庫和網(wǎng)絡(luò)資源對RS的生物信息分析結(jié)果：Rs具有chalstilsMlt和ChalstilsyntC兩個結(jié)構(gòu)域；五種葡萄屬源的RS氨基酸序列間具有95％以上的同源性，得到了葡萄屬RS的保守氨基酸序列：并根據(jù)這些制作得到Rs的三維結(jié)構(gòu)圖譜；RS在植物細胞中的細胞核、線粒體基質(zhì)空間、微體(過氧化物酶體)、葉綠體類囊體膜中的分布概率分別為：88％、36％、313％